藏药十五味云鹏散含汞制剂及无汞制剂对免疫低下小鼠免疫功能影响比较.docVIP

藏药十五味云鹏散含汞制剂及无汞制剂对免疫低下小鼠免疫功能影响比较 　　[摘要] 目的 研究藏药十五味云鹏散含汞制剂和无汞制剂对免疫低下小鼠免疫功能的影响。 方法 选择90只Balb/c种雌性小鼠，按体重随机分为空白组、模型（环磷酰胺）组、阳性（胸腺肽肠溶片0.01 g/kg）组、十五味云鹏散含汞制剂高、中、低剂量（0.38、0.18、0.09 g/kg）组及无汞制剂高、中、低剂量（0.38、0.18、0.09 g/kg）组，每组各10只；除空白组外，其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺，造成免疫功能低下的动物模型。各给药组于第4天开始灌胃给药，连续给药10 d，空白组和模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。在末次给药1 h后，颈椎脱臼处死小鼠，分别测定小鼠的脾脏系数、胸腺系数、血清溶血素水平（HC50）以及二硝基氯苯诱导迟发性变态反应（DTH）发生情况。 结果 与模型组比较，十五味云鹏散含汞制剂高、中剂量组和无汞制剂高、中剂量组均能明显提高免疫低下小鼠脾脏系数、胸腺系数和HC50（P 　　1 材料与方法 1.1 药物 十五味云鹏散，规格：0.7164 g/勺，生产批号由青海大学医学院提供；注射用环磷酰胺，规格：0.2 g，生产批号江苏盛迪医药有限公司；胸腺肽肠溶片，规格：20 mg/片，生产批号：140403，哈高科白天鹅药业集团有限公司；0.9%氯化钠注射液，规格：250 mL：2.25 g，批号：2414120807，青州尧王制药有限公司 1.2 试剂 2，4-二硝基氯苯，批号：2015年04月01日，上海中秦化学试剂有限公司；硫化钠，规格：500 g/瓶，生产批号：060320，成都金山化学试剂有限公司；丙酮，规格：500 mL/瓶，生产批号：2006年04月26日，天津市化学试剂六厂；豚鼠血清，规格：100 mL/瓶，生产批号：150526，广州鸿泉生物科技有限公司；20%绵羊红细胞（SRBC），规格：100 mL/瓶，生产批号平睿生物科技（北京）有限公司；羧甲基纤维素钠，生产批号常州市武进庙桥第二化工有限公司 1.3 动物 90只Balb/c小鼠，SPF级，雌性，6～8周龄，重量18～22 g，购于中国农业科学院兰州兽医研究所，合格证号：SCXK（甘）2010-0001；实验前在实验室饲养1周，适应环境。室温：20～26℃，相对湿度40%～60%，自然光照，排气扇通风，自由饮食、摄水 1.4 仪器 电子天平，型号JD1060-2，沈阳龙腾电子称量仪器有限公司；7 mm打孔器；离心机，型号TDL-40B，上海安亭科学仪器厂；电热恒温水浴锅，型号HH-4，国华电器有限公司；紫外可见分光光度计，型号UV-2550，日本岛津 1.5 方法 90只健康Balb/c种雌性小鼠经适应性喂养1周后，按体重随机分为9组，分别为空白组、模型组（环磷酰胺）、阳性组（胸腺肽肠溶片0.01 g/kg）、十五味云鹏散含汞制剂高、中、低剂量组（0.38、0.18、0.09 g/kg）及无汞制剂高、中、低剂量组（0.38、0.18、0.09 g/kg）组，每组10只。除空白组外，其他各组小鼠在实验前3 d腹腔注射环磷酰胺溶液50 mg/kg 1次，连续3 d，制备免疫功能低下的动物模型，空白组注射等量的生理盐水作对照[8]。第4天各给药组开始灌胃给药，连续给药10 d，给药前各组药物的水溶液经超声器震荡处理（37℃ 30 min），空白组和模型对照组灌胃给予等体积的蒸馏水 1.6 观察指标 1.6.1 耳廓皮肤迟发性超敏反应 各组小鼠于给药第2天以7%硫化钠溶液涂抹腹部进行脱毛，涂抹腹部脱毛范围为3 cm×3 cm，将5% DNCB丙酮溶液0.05 mL均匀涂布在脱毛区域致敏，于给药第5天强化1次，在第10天末次给药后1 h，将1% DNCB丙酮溶液0.02 mL均匀涂布于小鼠左耳进行攻击，使局部产生水肿，攻击后24 h，颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳片，用打孔器取下直径7 mm的耳片，称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度，将其作为迟发性超敏反应（DTH）观察指标[8-9] 1.6.2 血清溶血素生成水平 各组小鼠于给药第1天腹腔注射20% SRBC悬液0.2 mL/只，实验开始前禁食12 h。末次给药1 h后，眼底静脉丛取血，放置1 h，用长针将凝固血与管壁剥离，使血清充分渗出，2000 r/min离心10 min，并用生理盐水将离心后的血清按1∶500比例稀释，将稀释后的血清1 mL 10%SRBC悬液0.5 mL和1 mL 10%豚鼠血清加入5 mL离心管中，轻轻颠倒混匀。离心管放置于试管架上，37℃水浴保温10