复合分子印迹聚合物体系选择性富集蛋白质样品中.PDFVIP

维普资讯 V01．29 高 等 学 校 化 学 学 报 No．3 2008年 3月 CHEMICALJOURNA1OFCHINESE UNIVERSITIES 505～509 复合分子印迹聚合物体系选择性富集 蛋 白质样品中的溶菌酶 刘秋叶 ，盖青青 ，何锡文 ，李文友 ，陈朗星 ，张玉奎 (1．南开大学化学学院，天津 300071；2．中国科学院大连化学物理研究所，大连 116011) 摘要 考察了功能单体与模板蛋 白的反应摩尔比、溶液pH值及离子强度对功能单体与模板蛋 白之间相互作 用的影响，得出制备分子印迹聚合物的最佳条件．在最佳条件下，以溶菌酶 (Lyz)为模板分子，丙烯酰胺 (AA)和 Ⅳ，Ⅳ一亚甲基双丙烯酰胺 (BisAA)为聚合基质，二氧化硅为固体制孔剂，制备了复合分子印迹聚丙 烯酰胺凝胶，并用平衡吸附实验研究了其吸附性能和识别选择性．研究结果表明，该聚合物对模板蛋白有较 高的亲和性 、选择性和吸附容量 ，可以从蛋白质混合溶液中分离富集模板分子． 关键词 复合分子印迹聚合物；溶菌酶 ；二氧化硅；聚丙烯酰胺凝胶 中图分类号 0657．3 文献标识码 A 文章编号 0251—0790(2008)03-0505-05 分子印迹聚合物(Molecularlyimprintedpolymers，MIPs)是一种可以识别 目标分子的人工受体，它 与天然产物相比，具有高选择性、化学和机械稳定性等优点 ¨卫，这些特点是其它分离技术很难具备 的．近年来分子印迹技术(Molecularlyimprintingtechnology，MIT)发展很快，已经成功地应用于色谱填 料、固相萃取、催化和生物传感器等领域 -6-．目前比较成熟的印迹研究工作主要集中在一些简单的 小分子上，如氨基酸、药物、除草剂和金属离子等 卜“；而对大分子尤其是水溶性生物大分子，因存 在着体积庞大、结构复杂、可结合位点多及容易变性失活等因素，采用常规方法对其进行印迹研究相 当困难 ；但仍有不少学者对印迹蛋 白质进行了有益的尝试 ，并且取得了很大的进展’心 ． 聚丙烯酰胺具有 良好生物兼容性，并有柔软的大孔结构，容易使体积庞大的蛋 白质进 出等优点． 迄今为止，已有很多研究工作者用聚丙烯酰胺制备了识别蛋 白质的分子印迹聚合物 ． 将具有大孔和较大比表面积的基体，如二氧化硅、三氧化二铝和二氧化钛等氧化物加入到预聚合 溶液中，与模板分子、交联剂和功能单体共同预组装，形成具有特殊性能的分子印迹聚合物．把制孔剂 基体和模板分子从聚合物中移除后，得到大孔聚合物，同时留下使模板分子容易进 出的大孔渠道和与 其互补的识别位点．应用此印迹过程 ，能成功地印迹小分子，如有机分子、氨基酸和短肽等 ． 本文选用二氧化硅作制孔剂，可明显提高分子印迹聚合物对大分子(如蛋 白质)的吸附容量．采用 紫外光谱法考察了功能单体与模板分子的反应摩尔 比、溶液 pH值及离子强度对功能单体与模板分子 I@PVI互作用的影响，确定了制备印迹凝胶聚合物的最佳条件．在此条件下，以溶菌酶为模板分子，丙 烯酰胺为功能单体， ，V／一亚 甲基双丙烯酰胺为聚合基质，二氧化硅为固体SU-tLC0，制备了可以富集大 分子的印迹聚丙烯酰胺凝胶．同时考察了该印迹凝胶聚合物的吸附性能和识别选择性． 1 实验部分 1．1 试~tJ,n仪器 、 二氧化硅 (40～60 m，15niI1，百灵威化学技术有限公fI])；溶菌酶(Lyz，M =14300，pl=11．0)、 收稿F1期：20074)6—12． 金项 u：国家 “九 汁划(批准号：‘2007CB914101)、国家 自然科学基金(批准号和天津市 自然科学基金 (批准 06YFJMJC02800，07JCYBJ(：00500)资助． 联系人简介 ：何锡文，男，教授 ，M十，导师，从事分子识别 分子光谱研究 E—mail：xiwenhe@nankai．educqi 张 li ，刃，研究员， }一qi导