凝血讲义2011-10-28.ppt

二、凝血及纤溶实验室检测进展 血液凝固是一个复杂的生理生化代谢过程 实质是通过一系列酶促反应，使血浆中呈液态的纤维蛋白原转变成固态的纤维蛋白丝，因而凝血是属于生理生物化学范畴的课题 涉及血液学、分子生物学和免疫学等诸多领域由于这些相关学科研究的日益深入，不断地给凝血的理论和实践注入新的内容，因此，在测定方法学上也由过去精密度低的方法过渡到精密度高的方法。 凝血及纤溶检测方法 凝血及纤溶检测项目越来越多， 目前应用的实验大体分为：筛筛选试验 和确证试验 方法学上又可分为三大类： 功能测定 免疫学测定 化学测定 功能测定 即传统的最终以出现纤维蛋白作为判断依据的方法 如凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT），以及用各种缺乏因子血浆测定某一凝血因子含量的方法等 功能测定 PT测定是检测凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的过筛试验，要用统一标有国际敏感指数(ISI)的凝血活酶试剂，在抗凝治疗监控和决定用药剂量时，一定要用国际标准化比率(INR)报告 APTT是公认较好的检测“内源性”凝血因子缺陷的过筛试验，基本上可用于代替了过去的凝血时间测定，凝血时间的测定不管是玻片法还是试管法，都过于粗糙，敏感性太差。以前用于个别凝血因子缺乏的一些“纠正”试验以及所谓的“凝血活酶生成”试验，都因操作繁琐，敏感性不高，已经淘汰 免疫学测定 是近年来发展最快的检测方法，其原理是以纯化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后用抗原抗体反应原理对被检物质进行定性或定量测定 其方法采用ELISA、胶乳微粒凝集、火箭电泳等方法。对许多新发现的抗凝因子，纤溶和纤溶抑制因子，纤维蛋白原裂解，纤维蛋白原和纤维蛋白降解产物，凝血酶原活化等过程中被切下的小肽，如我们目前开展的FDP、D-二聚体等的测定，基本上都用免疫学方法检测 免疫学测定 从理论上讲，免疫学测定不可能全部取代功能测定。因为免疫学测定的仅是该因子的抗原性，只能表明体内存在该因子，但却不能说明其是否有生物活性，而功能测定则是测该因子在凝血或纤溶中的生理生化功能。 化学测定 理论根据是：许多凝血、抗凝及纤溶因子本身是水解酶，可以用人工合成含有该酶酶切位点并带有色原（指示剂）的寡肽作为底物，用常规的生化比色法加以测定。国内外已有一些合成的底物用于测定，诸如ATⅢ、凝血酶、FⅨ、FⅩa，以及纤溶酶等等。 三、凝血及纤溶实验质控 质量是医学检验工作的生命线，是当今医学检验工作中的关键问题 凝血与纤溶检验质量，关键在于诊断试剂。 以往，大量凝血检测试剂由于各实验室自行制备，手工操作难以达到规定的质量标准和全国、全球标准化，也难以达到室内、室间质控的要求 为此WHO和血栓和止血委员会（ICTH）制定了一些标准或提供少数统一的标准品供各国校准各种试剂和方法。国内市场上能购到的商品试剂来源，国外主要有美国、法国；国内有天津、上海、北京、福建等。 凝血及纤溶实验质控 我们临床检验工作者都要从方法学与试剂的标准化等方面严把质量关，全面系统地掌握新的知识动态，进一步提高质量意识，使我国在凝血与纤溶测定总体水平上进一步提高，与国际接轨。 凝血及纤溶实验质控 良好的检测结果靠三方面来获得: 精确度仪器：靠保养、靠校准 可靠的试剂：合格，优质 规范的操作：严格按SOP文件 凝血及纤溶实验质控 重复性--靠什么来保证？ 1、 仪器的重复性：包括仪器内部各个通道自身与各个通道之间的一致性 2、试剂、消耗品的重复性 只能在稳定的仪器上获得 凝血及纤溶实验质控 准确性： 是仪器、试剂、消耗品、操作人员的综合体现 包括：仪器的计算公式、标准曲线 试剂的保存、制备、存放效期 试剂污染来源的控制 质控—不规范洗针问题 高浓度清洗液洗针— 腐蚀样品针导致重复性下降 次氯酸钠残留导致干扰结果 低浓度清洗液洗针— 不能有效灭活凝血酶，造成交叉污染结果不准 针容易堵塞、半堵塞造成样本、试剂加样不准 日常工作中应注意的问题 （一）血标本应注意的问题1. 采血后标本在低温保存时间范围：有报道在32℃保存血浆6、12、24