二维琼脂疏散试验.pptVIP

双向琼脂扩散试验;教学重点 琼脂的制备方法 双向琼脂扩散实验的原理; 使用教材 《免疫学实验》第一版 朱道银 吴玉章 科学出版社 2008 ;概 述 临床免疫检验技术的出现最早可追溯至19世纪末。1896年，Widal发现在伤寒杆菌中加入伤寒病菌人的血清可致伤寒杆菌发生特异的凝集现象，利用这种凝集现象可有效的诊断伤寒病，这就是最早用于病原体感染诊断的免疫凝集试验，亦即著名的肥达试验(Widal test)。 ;常见的免疫检验技术： 经典的免疫学反应 凝集反应 沉淀反应 补体结合反应 中和反应 免疫电泳技术 免疫标记技术 免疫荧光 免疫酶技术 放射免疫测定　; 抗原抗体反应（antigen-antibody reaction）是抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。它既可发生在体内，也可发生在体外。 体外的抗原抗体反应表现为沉淀、凝集、细胞溶解、补体结合、中和反应等反应现象。;沉淀反应（precipitation）是可溶性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象。 影响沉淀反应的主要因素 1.抗原、抗体反应的浓度、比例 2.电解质 3.温度 4.酸碱度 ;分 类;Question:;实验原理;沉淀物形成的主要原是因为抗原与抗体分子表面的疏水基团相互接近而有效的排出它们之间的水分. 免疫复合物的形成通常经过两步:抗原与抗体的特异性结合;形成肉眼可见的免疫复合物晶格;1.检测未知抗原或抗体 2.抗原性质分析 3.抗体效价滴定 4.抗原或抗体纯度鉴定;Ag;1:待检Ag 2:标准Ag; 1.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。; “1” 为单一抗原抗体系统。;单向免疫扩散;1.测定沉淀环直径 2.在标准曲线上查找相应抗原浓度; 影响因素;实验材料;实验方法;3．加样：于中央孔加入兔抗人 IgG，周围 1-4 孔加入倍比稀释不同浓度的人血清， 5孔加入生理盐水作对照。每孔各加15μl。4．将琼脂板平放于湿盒内，置37℃温箱中，分别于24小时观察结果。;实验结果判定;结果分析 沉淀线与中央孔的距离随抗原的浓度减小而???大。 ;结果分析;注意事项;思考题;