新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究.pdfVIP

2007年12月 湖南师范大学自然科学学报 Vo1．3O No．4 第3O卷第4期 Journal of Natural Science of Hunan Normal University Dec．，2007 新型蛋白酶抑制剂基因hwtx．11 在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究 夏立秋 ，曾 智 ，贺小红，付祖姣，单世平，丁学知，孙运军，李文萍，王海龙，罗玉双 (湖南师范大学生命科学学院，微生物分子生物学湖南省重点实验室，中国长沙 410081) 摘 要 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx一11克隆至载体pGEX4T一1上，在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行表达．重组菌株在IPTG诱导下，经SDS—PAGE和Western blot分析表明，表达的GST—HWTX一11融合蛋 白的相对分子量约为33 kD．对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定，GST—HWTX一11融合蛋白对甜菜夜 蛾(Spodoptera exigua Hubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3 d时的 分别为86．6 mL、119．4 mL；其 与CrylAc对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用． 关键词 HWTX-11；融合表达；Western blot；生物活性测定 中图分类号 Q78 文献标识码 A 文章编号 1000—2537(2007)04-0090．04 Cloning，Expression of HWTX-1 1 Gene in E．coil and Its Bioactivity XIA Li—qiu ，ZENG Zhi ，HE Xiao—hong，FU Zu-fiao，SHAN Shi-ping，DING Xue—zhi， SUN Yun n，LI Wen-ping，WANG Hal—long，LUO Yu—shuang (Cortege of Life Science，Hunan Normal University； Key Laboratory of Microbial Molecular Biology of Hunan Province，Changsha 410081，China) Abstract The gene Of spider toxin，hwtx一1 1 has been synthesized by chemical method and cloned into the prokaryotic vector pGEX4T一1．The GST—HWrrx一1 1 fusion proteins were expressed by IPTG induction and detected by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis(SDS—PAGE)and Western blot with polyclonal antibod— Y．The results showed that the molecular mass of the fusion protein was 33 kD．Bioassay showed that the LC50 against Spoptera exigua Hubner and Helicoverpa arraigera reached 86．6 mL、119．4 laezmL，respectively．More over， being synergism between GST-HWTX一1 1 and CrylAc against@optera exigua Hubner and Helicoverpa armigera． Key words HWTX一1 1；fusional expression；Western blot；bioassay 多年来我国农作物虫害防治主要依赖化学农药，但有残留的化学农药的大量使用导致生态环境被