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蛋白质组学在肝癌研究中的应用 　　摘要：肝细胞肝癌是世界上病死率最高的恶性肿瘤之一。蛋白质组学以细胞、组织或器官表达的所有蛋白质为研究对象，通过双向凝胶电泳、生物质谱技术及生物信息学等方法，达到分离、鉴定、分析蛋白质的目的。蛋白质组学是继基因组学后兴起的一门新兴学科，本文综述蛋白质组学技术在肝癌研究中的应用 关键词：蛋白质组学；肝癌；双向凝胶电泳 就肝癌而言，蛋白质组学是一种有效的研究方法，其能够从整体，动态，定量的研究肝癌过程中蛋白质的种类和数量的变化，有利于肝癌特异性标志物的筛选，肝癌治疗靶点的确定，判断其是否转移及其术后的转归，进一步深入了解肝癌的发病机制，为其诊断、治疗、预后带来新的思路 1 寻找诊断标志物和药物靶点 肿瘤标记物是特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤反应而产生的物质，这些物质存在于肿瘤细胞和组织中，也可以存在于体液中。运用蛋白质组学技术研究肝癌，将肝癌患者和正常状态下的蛋白质表达谱进行对比，找到肿瘤状态下表达的蛋白质，作为肝癌早期诊断和预后的特异性标志物，为肝癌的诊断治疗提供新的依据。现在，人们已经在细胞、血清和组织水平三个层面开展了蛋白质组学研究 1.1细胞水平的研究 任何疾病在出现病理变化之前，细胞内的蛋白质在成分和数量上都会有相应的相应的变化。所以通过对细胞的总蛋白进行动态观察可筛选出肝癌的差异蛋白作为标志物 1.2血清水平的研究 理想的生物学标志应该具有特异、敏感、有预见性、高浓度，在临床前和临床阶段起桥梁作用，可以通过非侵入性操作测定等。因为体液中的蛋白质能够反复的获得，并且包含许多未知的生物学标志，这可能与疾病早期蛋白质水平出现的细微的变化有关，因此，在血清水平寻找生物学标志将是较好的选择 Comunale等利用蛋白组学技术分析比较了HBV相关肝癌患者和、慢性肝炎患者以及正常人血清，发现部分蛋白核心高度的岩藻糖基化，包括AFP在内的19种岩藻糖基化蛋白明显升高，并且这些岩藻糖基化蛋白在AFP阴性的肝癌患者中也明显升高，其价值可能优于AFP，可以进一步作为肝癌早期检查的血清标志物，为进一步筛选肝癌早期诊断特异性标志物提供了新的研究依据 2 蛋白质组学在判断肝癌转移中的作用 转移是影响癌症患者生存的首要因素，有人将癌症转移作为本世纪迫切需要迫切攻克的生命科学问题之一。通过不同转移潜能的肝癌细胞株的蛋白建立表达谱，比较蛋白差异，以筛选肝癌转移的出关键蛋白质分子 S.J.Ding等通过对MHCC97-H和MHCC97-L的蛋白分析，发现了56个有显著差异的蛋白，其中22种在细胞株MHCC97-H中表达增加，36种表达降低，还发现在细胞株MHCC97-L中不表达的四种蛋白，是MHCC97-H的专属表达蛋白。他们还通过进一步的实验发现CK19在肝癌细胞的过表达与其转移相关，由此推测CK19的血清水平可能对某些肝癌患者的疾病进展有一定的影响，所以CK19可能成为预测肝癌转移的有用的标志物，为临床肝癌转移的治疗提供帮助 3 蛋白质组学在肝癌发展不同分期诊断中的应用 不同分期的疾病有不同的治疗的策略才能达到最佳的治疗效果，寻找不同分期肝癌标志物蛋白，对肝癌患者的不同分期诊断和治疗有重要的指导意义 本课题组通过双向凝胶电泳技术对中晚期原发性肝癌各组总蛋白进行蛋白质组表达谱的建立，得到重复性较好，背景较为清晰的7cm凝胶电泳图谱，并进行PDQUEST软件比对发现共有10个差异点在两组中有所改变，其中，晚期上调8个，下调2个。预测可能此差异蛋白可能作为不同分期诊断的蛋白标志物，需要进一步的质谱分析和研究 4 蛋白质组学在肝癌的治疗、术后复发及预防中的应用 目前，手术切除仍然是肝癌治疗的重要手段，肝移植是肝癌可能治愈的主要方法。临床上小肝癌直径小于3cm其术后5年生存率为85%，小于5cm为65%，较大肝癌治疗原则是先进行介入治疗再手术治疗。但是临床上很多患者诊断肝癌时已是晚期，尽管在进行手术治疗的同时，也进行介入治疗、免疫治疗、化学治疗及中药治疗等辅助治疗，但其术后的总体复发率仍很高，是影响肝癌预后的主要因素。肝癌的复发是一个多因素、多环节、多阶段的过程，其确切机制尚不明确 柏斗胜等将质谱技术应用于肝癌复发组和未复发组的差异表达蛋白研究，得到有定量信息的蛋白有149个，其中在复发组表达上调两倍以上的蛋白共29个，表达下调2倍以上的蛋白共23个，这些蛋白主要参与体内代谢、氧化还原和信号传导等过程。Fiorentino等用免疫组化的方法对依耐性细胞周期素激酶抑制剂p27、E-钙粘连蛋白、β-连接蛋白、细胞周期相关性核抗原（MIB-1）表达水平进行监测，分析这些指标和术后肝癌复发、预后的关联性。研究发现MIB-1