离体培养植物细胞的表面与农杆菌介导基因转化频率的研究.pdfVIP

华北农学报 200 1 ,16 (3) :23～27 　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Acta Agriculturae Boreali - Sinica 　 离体培养植物细胞的表面与农杆 菌介导基因转化频率的研究 郭骁才 ( 中国科学院成都生物研究所 , 四川 成都 　6 1004 1) 摘要 : 以玉米 、黑麦 、烟草为材料 , 对细胞表面进行了扫描电镜观察 , 研究了离体培养植物细 胞的细胞壁外表面的结构及其变化与农杆菌介导转化频率之间的关系 。正常继代培养的烟草细 胞 , 其细胞壁外表面光滑 , 大部分细胞在扫描电镜下坍陷或皱折 ; 经处理用于农杆菌介导转化 的烟草细胞 , 其表面有很多颗粒状突起和纤丝状物或纤丝状网; 光滑的表面很少见到菌 , 而粗 糙表面则有很多菌 。玉米和黑麦愈伤组织中 , 浅黄色 、疏松易散的胚性细胞团 , 其表面细胞有 很多未坍陷 , 相当一部分未坍陷细胞的细胞壁外表面与烟草细胞一样 , 具有很多较小的颗粒状 突起和纤丝状物或纤丝状网; 白色松软的愈伤组织 , 其外层细胞大多坍陷或呈柱状 , 未坍陷细 胞的表面光滑 , 有些似有一层膜状物 。对植物细胞壁上的农杆菌结合位点和基因转化频率进行 了讨论 。 关键词 : 离体培养 ; 细胞壁外表面 ; 农杆菌介导 ; 转化频率 ( ) 中图分类号 : S188 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 1000 - 709 1 200 1 03 - 0023 - 05 目前 , 植物基因工程应用的限制因素是基因转化技术与方法 。自 1983 年第 1 例转基因 植株成功以来 , 植物基因转化技术方法已发展到 20 种左右 〔1～3 〕, 其中最理想的技术仍是农 杆菌介导技术 。然而 , 由于宿主特异性的原因 , 农杆菌介导技术难 以用于禾谷类植物〔4 〕, 〔5 〕 而对禾谷类植物 进行遗传改良一直是人类奋斗的目标 。 农杆菌难以转化禾谷类植物细胞的原因之一 , 是认为禾谷类植物细胞的表面没有农杆菌 〔6 〕 〔7 〕 结合位点 。然而 , 1992 年以来 , 用农杆菌介导基因转化水稻 、玉米等的技术有所突破 , 这说明禾谷类植物细胞的表面也有农杆菌结合位点 。在我们以前的植物基因转化研究中发 现 , 一定的处理可使农杆菌介导的基因转化频率提高很多 , 结合我们对植物细胞的表面与细 胞间作用的研究结果 〔8 〕, 我们认为植物细胞表面的农杆菌结合位点是可以诱导产生的 , 禾 谷类植物细胞亦不例外 。本试验以植物基因转化的模式植物之一烟草和主要的禾谷类植物玉 米 、黑麦为材料 , 对细胞表面进行了观察 。 1 　材料和方法 11 　材料及离体培养 ( ) ( ) ( ) 所用材料有普通烟草 N icot iana t abacu m , 玉米 Zea m ays 和黑麦 S ecale cereale 的离 收稿 日期 : 1999 - 12 - 20