镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆与表达分析.pdfVIP

第14卷 第4期 寄生虫与医学昆虫学报 Vo1．14．No．4 2007年12月 Acta Parasito1．Med．Entomo1．Sin Dec．，2007 镰形扇头蜱IgG结合蛋白基因的克隆与表达分析* 万修红 ， 周勇志 向飞宇 张文杰 周金林 (1．中国农业科学院上海兽医研究所，农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200232； 2．上海师范大学生命与环境科学学院，上海 200234) 摘要 本实验以镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺的抑制消减杂交cDNA文库中的EST数据为基础，应用 RACE方法从镰形扇头蜱体内克隆出一个IgG(IgG binding protein，IGBP)基因的全长序列，该基因全长683 bp，编码178个氨基酸，预测分子量为19．5 kDa，经同源性比较该基因与具尾扇头蜱的IGBP-MB基因序列 的同源性高达92％。用 RT-PCR方法分析了该基因表达的性别特异性、各个器官、不同发育阶段的表达情 况。结果表明，该基因表达没有性别特异性；IGBP基因在唾液腺、壳这2个器官有所表达，但在肠中却没 有表达；在蜱的各个发育阶段均有表达。 关键词 镰形扇头蜱；IgG结合蛋白；RACE；RT-PCR；克隆 蜱是一种专性吸血的体外寄生虫，隶属于蜱 成为抗蜱疫苗的候选抗原分子之一。 螨目蜱亚目。蜱包括3科：硬蜱科、软蜱科和纳 M196是镰形扇头蜱吸血前后雄蜱唾液腺抑 蜱科，中国发现有 110多种 (赵辉元，1996)， 制消减杂交cDNA文库中的一个EST数据 (向飞 全世界约有 899种 (Barker and Murrell，2004)。 宇等，2006)，经 Blast比较，它与具尾扇头蜱 蜱的危害不仅在于吸食人和脊椎动物的血液，更 (Rhipicephalus appendiculatus)IGBP．MB基因序列 重要的是它们是人和动物重要疾病病原的传播媒 (AF0o1869)具有较高的同源性，推测它可能是 介，经蜱传播的疾病包括病毒、螺旋体、立克次 镰形扇头蜱一个 IGBP基因，为了解该基因的结 氏体、细菌和原虫 (周金林，2004)。镰形扇头 构及基表达特点，本研究采用RACE方法扩增出 蜱 (Rhipicephalus haemaphysaloides)属于硬蜱科 该基因的未知部分，进一步克隆获得包含该基因 扇头蜱属，该蜱是我国南方的优势蜱种，分布全 片段之基因全长。 国15个省，主要传播牛巴贝斯虫病、马巴贝斯 虫病和吉氏巴贝斯虫病 (陈天铎等，1992)。 1 材料与方法 目前控蜱的主要手段是化学方法，但是化学 药品所引起的环境污染、食品安全和蜱的抗药性 1．1 蜱 等问题日趋严重，迫切需要寻找新的可持续控制 镰形扇头蜱，采自湖北武昌，经兔体人工饲 策略。现已试用了多种新的防预策略，其中免疫 养获得的单雌子代群。新西兰兔购自中科院上海 学方法是最具潜力的措施。1981年，Aekerman 实验动物中心。 等发现，蜱可以把进入其血腔的宿主免疫球蛋白 1．2 菌株与试剂 (Immunoglobulin)分子通过唾液腺排出体外，表 大肠杆菌DH5a由本所国家重点实验室提 明蜱有一套保护自己免受宿主抗体袭击的机制。 供。TRIZOL试剂、3 RACE、5 RACE试剂盒购自 1994年，蜱血淋巴和唾液腺的IgG结合蛋白 Invitrogen公司；Taq DNA聚合酶、胶回收试剂 (IgG binding protein，IGBP)的发现，使得蜱对宿 盒、质粒提取试剂购自TaKaRa公司；pGEX．T 主Ig的消除机制得到进一步明确 (Wang and Easy载体购自Prome