原位杂交在甘蔗遗传育种上的应用现状与前景.pdfVIP

第 13卷 第4期 华 南 热 带 农 业 大 学 学 报 2o07年 12月 Vo1．13 No．4 J0URNAL 0F S0UTH CHINA UNIVERSITY OF I’R0PICAL AGRICULTURE DeC．2007 原位杂交在甘蔗遗传育种上的应用现状与前景术 应雄美 蔡 青 范源洪z 马 丽 刘新龙 毛 均 (1云南农业科学院甘蔗研究所 云南开远 661600； 2云 南 省 农 业 科 学 院 昆 明 650231) 摘要 介绍原位杂交技术的发展、方法及其应用条件．分析原位杂交技术在甘蔗染色体水平和分子水平上的研 究进展及该技术在甘蔗研究中的应用情况，并展望其应用前景。 关键词 原位杂交(ISH) 遗传育种 甘蔗 中图分类号 $566．1 原位杂交技术(in situ hybridization，简称 1 原位杂交技术的发展 ISH)自Gall和Pardue及John等 q 于 1969年分 随着分子遗传学的迅猛发展，原位杂交新技术 别独自建立以来，该技术得到了很大的发展。如原 也不断地涌现，并在动植物研究中得到广泛的发展 位杂交技术中用非放射性标记(生物素标记等)代替 与应用。原位杂交技术最早是以3H标记的探针来 了放射性标记．ISH和PCR结合产生的原位PCR技 进行杂交的，它敏感性较高，在定位单拷贝序列的 术大大提高了检测的灵敏度．荧光原位杂交技术可 研究中应用较广。如在人类染色体上定位单拷贝序 同时检测到不同荧光素标记的多个探针位点H]，因 列(1～2 Kb)，鉴定小麦 一黑麦易位系等。但是由 而使得该技术在人类和动物遗传领域得到了迅速推 于操作上的复杂性、危险性，很快就被非放射性标 广和应用。在植物科学领域，虽然由于植物组织细 记的生物素和荧光素探针所代替。 胞有细胞壁覆盖和细胞质对染色体分析的干扰，使 Langer—saferl7 在 1982年就利用了生物素标 得该技术在植物染色体研究上要落后于对人类和哺 记的探针进行原位杂交的研究，这一技术在植物中 乳动物的研究 但随着近几年来染色体显带技术、 的首次应用是Rayburn和Gi l[ 于1985年用于黑麦 荧光标记技术、电镜技术等检测技术的发展和完 重复DNA序列探针小麦染色体的定位。与此同时， 善，在主要的粮食作物(小麦、水稻、玉米等)上 利用荧光素直接标记的快速原位杂交方法(FISH)也 也取得了大量的研究成果：如植物基因组的染色体 出现了。FISH刚出现的时候，有许多缺点，如耗 物理作图嘲，外源染色体和染色体片段的鉴定，物 时、复杂，而且常在一些细节上失败而导致有价值 种进化和亲缘关系的探讨，染色体变异(异位和互 的染色体标本的浪费。例如，甲酰胺常用于降低 换)的鉴定同等。由于甘蔗的遗传基础高度杂合性 DNA的熔点，但过量的甲酰胺易导致染色体结构异 和遗传背景复杂，因此，国内目前细胞学的研究仅 常，破坏染色体。在用缺口平移法对DNA片断进行 限于染色体的核型分析比较以及显带技术，原位杂 荧光素标记的过程中，如孵育温度不精确控制则会 交技术在甘蔗细胞和分子遗传学研究中的应用报道 阻止聚合作用导致标记强度降低 Reader等¨g 在研 较少。然而，随着甘蔗分子遗传学研究的发展及甘 究小麦一黑麦染色体配对中，对FISH进行了改进． 蔗遗传连锁图谱的构建(如割手密ses208、栽培种 建立了荧光素直接标记的快速原位杂交技术，可以 R570F1代等