含马兜铃酸中药单方马兜铃及复方龙胆泻肝丸的体外遗传毒性研究.pdfVIP

第46卷 第6期 复旦学报 (自然科学版) Vl0I．46 No．6 2007年12月 Journal of Fudan University(Natural Science) Dec．2007 文章编号：0427—7104(2007)06—0992—04 含马兜铃酸中药单方马兜铃及复方龙胆 泻肝丸的体外遗传毒性研究 马康目 ，陈 灵2 (1．上海交通大学医学院，上海200025；2．上海交通大学生命科学技术学院，上海200240) 摘 要：采用Ames试验和小鼠淋巴瘤致突变试验(M1，A)来检测单方马兜铃及复方龙胆泻肝丸的遗传毒性，评 价其相关细胞毒性和复方减毒效果；为进一步建立综合的中药遗传毒性测试平台提供试验依据．分别通过对含 马兜铃酸 (Aristolochic Acid，AA)浓度为20和40~g／mL，加s9或不加s9的条件下的两味中药的Ames法检测； 以及采用MLA96孔微孔板接种法分别对单复方含马兜铃酸浓度为5 gg／mL的L5178Y／tk“一。3．7．2c细胞进 行染毒，并进行接种效率(PE)，相对总增长率(RTG)和突变频率(MF)的测定．结果表明单方马兜铃具有细胞毒 性且致突变性较强，以诱导大范围DNA损伤为主；而复方龙胆泻肝丸具有较明显的减毒效果；IVILA和Ames试 验组合适用于体外中药遗传毒理检测． 关键词：马兜铃酸(AA)；单方马兜铃(FA)；复方龙胆泻肝丸(LDXGW)；Allies试验；MLA 中图分类号：R 963 文献标识码：A 随着对马兜铃酸和含马兜铃酸的中药的进一步研究及其在临床的应用，发现其具不良反应，包括肾毒 性作用，较强的致突变、致癌作用，其毒性已引起广泛关注．目前国内尚未建立一个系统性的，针对中药遗 传毒理的综合检测平台．早日建立一套标准、可靠、有代表性的评价体系成为目前中药安全使用在临床上 的关键．目前没有一种检测方法可以检测出所有的遗传突变位点…1．国际上评价物质遗传毒性时选用多 个试验综合考虑．一个标准遗传毒性试验组合由体内和体外两类组成，体外试验通常选用Alnes试验和1 ～ 2种哺乳动物细胞突变试验，哺乳动物细胞突变试验最常用的是染色体畸变试验和小鼠淋巴瘤细胞试 验(MOHSe Lymphoma Assay，MLA)L2 J．本文以检测小范围突变为主的Nines试验和检测突变范围较宽的 MLA组合来对含马兜铃酸的中药进行一个较全面的体外遗传毒性评价，并关注单复方中与中药安全性密 切相关的四个指标：细胞毒性指标，遗传毒性指标，致突变样式和复方减毒规律的信息综合，为寻求中药毒 理较为理想的试验套路提供依据． 1 材料和方法 1．1 材料 1．1．1 A1TIP_．8试验 测试菌株TA97，TA98，TAIO0，TA102由美国加利福尼亚大学生化系惠赠，置于4℃冰箱待用．I)-生 物素购白TANABE SEIYAKU有限公司；S9购白复旦大学公共卫生学院． 1．1．2 MLA 小鼠淋巴瘤细胞株L5178Y／tk 一一3．7．2c由上海国家新药安全评价中心惠赠，指数分裂期时形成密 集的细胞聚集体经检验符合MLA有效性的要求[引，RPMI1640培养基(Gibco 31800 022)；马血清(Hy clone SH30074．03)；青霉素(华美BF 0883)；链霉素(华美BF 0961)；丙酮酸钠(华美BR 2283)；DMS0(L0t 收稿日期：2007。09—10 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：马康目(1984一)，男，博士研究生；通讯联系人陈 灵，男，教授，E—mail：lingchen@sjtu．edu．cn 第6期 马康目等：含马兜铃酸中药单方马兜铃及复方龙胆泻肝丸的体外遗传毒性研究 NO．427，Merck公司)；马兜铃酸 (AA)：Sigma#A5512；甲基磺酸 甲酯(Methyl— methansulfonate，MMS)Lot No．1 12K3710，Sigma 1．2 方法 1．2．1 Nines试验 选用TA97、TA98、TA100和TA102菌株，采用标准平皿掺人法，试验分非活化