电感耦合等离子体质谱间接法测定蛋白质含量.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第3期 of 321—324 2008年3月 ChineseJournal AnalyticalChemistry 电感耦合等离子体质谱间接法测定蛋白质含量 王萌1’2 丰伟悦“ 陆文伟3 李柏1 汪冰1’2 朱墨桃1’2 王云1’2 赵宇亮1’2 柴之芳1 1(中国科学院高能物理所，核分析技术重点实验室和纳米生物效应实验室，北京100049) 2(中国科学院研究生院，北京100049)3(上海交通大学，上海200030) 摘要尺寸排阻色谱分离牛血清白蛋白(BSA)，超氧化物歧化酶(SOD)和金属硫蛋白(MT)等3种标准蛋 白的混合物后，在线使用电感耦合等离子体质谱测定这三种蛋白中的S，并根据每种蛋白质含有的S原子数， mol／L 计算出3种蛋白质的相对含量。尺寸排阻色谱的流动相为0．1 Tris-HAc。向电感耦合等离子体质谱的 六级杆加入反应气O：，使之与s反应生成s0+，间接测定驾”O+而避开直接测量32s时存在的严重干扰。测 量结果与天平称量所得结果一致。方法的精密度好，每个蛋白质峰面积的RSD3％(疗=3)。BSA、SOD和 MT的检出限分别为14、52和27 pmol。 关键词硫，电感耦合等离子体质谱，碰撞池，尺寸排阻色谱，蛋白质定量 1 引 言 随着蛋白质组学的快速发展，特别是由于蛋白质在生命过程中动态变化的特点，定量蛋白质组学 (quantitativeproteomics)已成为蛋白质组学研究的重要组成部分，也是分析化学面临的一个巨大挑 战¨，2|。已有的蛋白质组学的定量方法。多采用生物质谱结合同位素标记技术得到蛋白质的相对含量J。 电感耦合等离子体质谱(ICP—MS)作为一种广泛应用的无机质谱技术，具有样品前处理简单、分析 速度快、检出限低、线性范围宽、易于与色谱联用以及能分析同位素比值等优点M面J。与电喷雾质谱 元素周期表中的几乎所有元素，而且这种元素的特征响应(element—specificresponse)与其原子所处的分子 环境无关r71。因此，利用ICP．MS分析蛋白质中的元素含量，有可能为定量蛋白质组学提供一种新的手段。 在ICP—MS可以测量的所有元素中，S是最适合作为蛋白质定量分析的内标元素哺J。这是由于S是 蛋白质中一种常见的元素，多数蛋白质都含有半胱胺酸或甲硫氨酸等含硫氨基酸；S原子多以共价键稳 定的存在于蛋白质分子中。如果某种蛋白质已经由生物质谱鉴定，或者这种蛋白质分子的氨基酸序列 和其中含有的S原子数已知，那么就可以通过ICP—MS测量S而对蛋白质定量。 低分辨率的四级杆ICP—MS测量s的困难在于等离子体中O：+所产生的严重的干扰，而使用碰撞池 (或反应池)技术可以克服这种干扰一一2I。一种方法是在碰撞池中加入xe作为碰撞气，通过电荷转移 本研究采用向碰撞池中加入O：的方法，避开了O：+等多原子离子对S测量的严重干扰，使用尺寸 出3种蛋白质的摩尔比，并与蛋白的称量结果进行了对比。 2实验部分 2．1仪器 X7 Thermo 2487紫外检测 (美国Waters公司)，含有Waters626泵、Rheodyne9725进样阀、20止定量环和Waters mmx7．8 mm×6 器；TSK—GELG3000SWxl凝胶柱(300mm)和保护柱(40 mm)(日本TOSOH公司)； 2007-07-20收稿；2007—10-08接受 (No．KJCX3．SYW．N3)和中国科学院核分析技术重点实验室基金(№，K一135)资助 ·E·mail：fengwy@mail．ihep．ac．cn