昆明白小鼠精原干细胞的体外培养.pdfVIP

第7卷第6期 潍坊学院学报 Vo1．7 No．6 20o7阜 11月 Journal of Weifang University NOV．20o7 昆明白小鼠精原干细胞的体外培养 王庆忠，刘慧莲 (潍坊学院，山东 潍坊 261061) 摘 要：建立了一种小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells，SSCs)的分离、纯化和培养体系，主要 包括SSCs的差异贴壁分选(differential adherence selection)、无血清培养基和MEF(mouse embryonic fibr0_ blast)饲养层。无血清培养基以StemPro一34 SFM为基础培养液，补充多种添加剂和GDNF(glial ce11 line — derived neurotrophlc factor)、可溶性GFRal(soluble GDNF family receptor 0【一1)和bFGF(basic fibroblast growth factor)等因子。昆明白小鼠(KM ． mice)幼鼠的生精细胞在这一培养体系中能够培养和增殖1个月 RT—PCR检测还表明培养的细胞同时表达Oct4和Sox2，说明SSCs与ESCs两者的自我复制可能享有共同 的维持机制。 关键词：精原干细胞；无血清培养基；昆明白小鼠 中图分类号：Q492 文献标识码：A 文章编号：1671—4288(2007)06～0056—06 在成年动物睾丸中，一部分SSCs进行自我复 则还需要bFGF和GFRal。但血清的加入会严重降 制，维持睾丸中的精原干细胞库，另一部分SSCs进 低SSCs自我复制能力。2003年，Shinohara等人口 ] 入分化程序，最终发育为成熟的精子。SSCs的体外 建立了一种与上不同的SSCs培养体系。主要不同 培养，尤其是在无血清培养体系中的培养是SSC自 点在于：①睾丸细胞分离自DBA／2遗传背景的0—2 我复制和分化机理研究的重要手段。然而，这面临 天的新生乳鼠；②基础培养基是StemPro一34 SFM． 着许多困难。一是睾丸中SSCs的数量极少，约占睾 另外补充了StemPro营养补充剂、多种添加剂、多种 丸总细胞数量的1／5000¨ ；二是SSCs没有特有的 激素和生长因子等；③根据睾丸体细胞在明胶包被 形态特征和特征性的分子标志，尽管已鉴定出SSCs 的培养皿中贴壁快的特性，他们通过差异贴壁分选 是 Oct4 、TRA98 l2-41、c—kit一 、c—Ret 。。 、Ep— 法分离和富集干细胞；④应用了MEF饲养层细胞。 CAM [ ， 、 NCAM [ 、MI-IC一1一、Thy～1 一 、v—in． 由于Shinohara等人培养的细胞是从gonocytes起始 1e鲥n [8]6一inte鲥n 、CD9 [mj和GFRal …等， 、 的，他们称这些于细胞为GSCs(germline stem cells)。 但它们都不是SSCs所特有的，使得SSCs的识别、纯 随后，该研究组u 进一步研究表明，低浓度的血清 化和培养成为一项重要研究课题。 (0．3—2％)是体外培养时GSCs克隆形成所必需 1998年，Brinster实验室首次报道了B6，SJL小 的；当GSCs体外稳定扩增时，血清对GSC自我复制 鼠SSCs在10％血清的DMEM和STO饲养层细胞上 有抑制作用。2004年，Ogawa等人 应用与此相似 体外培养的尝试[1 ，但这一培养体系并不适用于其 的培养体系成功地在体外长期培养了来自成年 它品系小鼠来源的SSCs培养 。2004年，该实验 DBA／2小鼠的SSCs。 室的Kubota等人_6， 建立了一种利用Thy—l抗体 根据这些研究资料，我们认为Shinohara的培养 通过流式细胞分选(fluorescent activated cell sorting， 体系是简便易行的。为此