Ursolic acid促K562IM对伊马替尼的敏感性的观察及其机制初探.pdfVIP

贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 Ursolic acid 促K562/IM 对伊马替尼的敏感性的观察及其机制初探 专业：血液内科学，研究生：李燕，导师：王季石 摘要：目的 本文旨在探讨熊果酸（Ursolic acid ；UA ）增强慢性髓系白血病 （chronic myelogenous leukemia;CML ）耐伊马替尼（Imatinib ，IM ）细胞株K562/IM 对伊马替尼的敏感性及其分子机制研究，为临床上克服CML 耐药提供新的理论基 础。 方法：培养K562/IM 细胞，分别用IM ，UA ，和两药联用处理细胞。MTT 检 测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡的情况；RT-PCR 及Western Blot 检测耐药相关基因及Nrf-2/Keap-1/HO-1 途径mRNA 及蛋白水平的变化。Fish 检测细胞中 Bcr-Abl 融合基因的改变。在体内实验中，构建K562/IM 裸鼠肿瘤模 型，皮下注射肿瘤细胞一周后，分别给予各组小鼠生理盐水，伊马替尼，UA+ IM ， 观察并记录裸鼠肿瘤生长大小及裸鼠中位生存时间。 结果 IM 与UA 联合处理细胞24 小时后，对K562/IM 的增殖抑制率明显低于 K562 细胞，联合用药增殖抑制率高于单药组；同样，联合用药处理细胞 24 ，48 小时后，凋亡率显著提高（p0.05 ）。RT-PCR 及Western Blot 结果显示UA 处理细 胞后，耐药相关蛋白MDR1 及GST-π 的表达下调，BCR/ABL 融合基因表达降低； 不同浓度的UA 处理K562/IM 细胞后，Nrf-2 ，HO-1 表达下调，Keap-1 上调，并 呈一定的浓度依赖性；用HO-1 抑制剂Znpp IX 联合UA 处理细胞，Nrf-2 ，HO-1 表达下调，Keap-1 上调，诱导剂Hemin 联合UA 联合处理K562/IM 细胞，Nrf-2 ， HO-1 表达与单用Hemin 相比表达无明显升高，Keap-1 表达较低（P0.05 ），FISH 检测结果显示：抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1 途径可伴随BCR/ABL 表达的降低。体内 实验结果显示伊马替尼联合 UA 作用后，K562/IM 肿瘤的体积明显小于单药组， 且中位生存期明显长于单药组。1 基金项目：国家自然科学基金资助项目;贵州省省长基金(黔省专合字[2010]84 号); 2 贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 结论 研究表明UA 在体外能够通过抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1 途径增强K562/IM 细 胞对伊马替尼的敏感性，从而下调 BCR/ABL 的表达，同时伴随着耐药相关蛋白 MDR-1 和GST-π 的下降，发生耐药逆转。在体内实验中，伊马替尼联合UA 能够 显著抑制Nude 裸鼠肿瘤的生长，并显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间。 关键词：CML，伊马替尼，K562/IM ，熊果酸，Nrf-2/Keap-1/HO-1 信号通路 贵州省科技厅对外合作项目(黔科合外G 字[2011] 7010 号) 3 贵阳医学院2013 届硕士研究生论文 略缩词表 HO-1 heme oxygenase-1 血红素加氧酶-1 CML chronic myelogenous leukemia 慢性粒细胞白血病 IM Imatinib 伊马替尼 RT-PCR Reverse Transcript Polymerase Chain Reaction 反转录聚合酶链式反应 Western blot 蛋白质印迹 MTT