TRIM3基因在原发性肝癌中表达及功能的初步研究.pdfVIP

目 录 中文摘要 1 Abstract 3 1 前 言 1 1.1 肝癌的研究进展 1 1.2 TRIM 家族研究进展 2 1.3 TRIM3 基因与肿瘤关系研究进展 3 2 材料与方法 4 2.1 实验材料 4 2.1.1 标本采集 4 2.1.2 克隆载体 5 2.1.3 主要仪器设备与化学试剂 5 2.1.4 常用的缓冲液、培养基等溶液的试剂配方 7 2.2 实验方法 8 2.2.1 实时荧光定量RT-PCR 检测TRIM3 基因表达 8 2.2.2 免疫印迹法对TRIM3 蛋白表达的检测 10 2.2.3 免疫组织化学染色检测肝癌石蜡切片中TRIM3 蛋白的表达 12 2.2.4 重组慢病毒载体构建、病毒包装与滴度检测 14 2.2.5 重组慢病毒转导肝癌细胞与表达检测 14 2.2.6 过表达TRIM3 对肝癌细胞生物学行为的影响 15 2.2.7 统计分析 17 3 结 果 18 3.1 实时荧光定量RT-PCR 检测TRIM3 基因表达 18 3.1.1 TRIM3 基因 mRNA 在肝癌及癌旁组织中的差异表达 18 3.1.2 TRIM3 基因 mRNA 在肝癌细胞系中的差异表达 19 3.2 TRIM3 蛋白在肝癌组织和肝相关细胞系中的表达结果 20 3.2.1 Western Blot 检测TRIM3 蛋白在肝癌组织及相应的正常肝组织中的差异表达. 20 3.2.2 TRIM3 蛋白在肝癌细胞系中的差异表达 21 3.3 石蜡包埋肝癌组织切片中TRIM3 的表达检测结果 23 3.3.1 TRIM3 蛋白在肝癌中表达情况 23 3.3.2 TRIM3 蛋白表达与肝癌临床参数之间的关系 24 3.3.3 TRIM3 在肝癌中的表达与预后的相关分析 26 3.4.重组慢病毒感染肝癌细胞TRIM3 表达检测 27 3.4.1 慢病毒感染后肝癌细胞中TRIM3 的mRNA 表达 27 3.4.2 慢病毒感染后肝癌细胞中TRIM3 蛋白的表达 29 3.5 TRIM3 对肝癌细胞生物学行为的影响 30 3.5.1 过表达TRIM3 抑制肿瘤细胞生长 30 3.5.2 过表达TRIM3 降低肿瘤细胞克隆形成能力 32 3.5.3 过表达TRIM3 对肿瘤细胞周期有阻滞作用 32 3.5.4 过表达TRIM3 诱导肿瘤细胞凋亡 32 3.5.5 过表达TRIM3 抑制肝癌细胞的体外迁移能力 36 3.5.6 过表达TRIM3 抑制肝癌细胞的体外侵袭能力 36 4 讨 论 39 5 总 结 42 参考文献 43 综 述 48 硕士期间发表的论文 56 附录 常用缩略词表 57 致 谢 58 TRIM3基因在原发性肝癌中表达及功能的初步研究 硕士研究生：晁洁（流行病与卫生统计学） 导 师：张建华 教授 中文摘要 研究背景及目的 肝癌 （hepatocellular carcinoma ，HCC ）是一种全球常见的恶性肿瘤，在所有实体 肿瘤中发病率居第五位，肿瘤相关死亡率居于第四位。我国为原发性肝癌的高发区， 近几年呈现发病率上升的趋势。尽管目前肝癌的治疗手段有了很大程度的进步，但是 肝癌预后并不理想，五年生存率只有25%-39% 。导致肝癌预后差的主要原因是恶性程 度高、血管侵犯及肝内转移。肝癌的发病过程是多种因素共同作用