TLR4在糖尿病大鼠脊髓中的表达及其意义.pdfVIP

TLR4 在糖尿病大鼠脊髓中的表达及其意义 麻醉学研究生： 颜建娥 导师： 王迪芬 教授 朱 涛 教授 摘要 目的研究Toll 样受体4 （TLR4 ）在糖尿病大鼠脊髓中的表达变化，探讨TLR4 与糖尿病并发症神经病理性疼痛的关系。 方法 84只SPF级SD雄性大鼠，体重180-200g, 将大鼠随机分为两组：正常对 照组 （C组，n=42 ）和糖尿病组 （DM组，n=42 ）。大鼠禁食14h后DM组按65mg/kg 一次性腹腔注射PH=4.38 、浓度为1%的链脲佐菌素 （STZ）溶液, C组腹腔注射 相同剂量的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液。一周后断尾取血测血糖，空腹血糖﹥16.7 mmol/L的大鼠为糖尿病模型制备成功。分别在0w、1w、2w 、3w、4w 、6w、8w 时测定大鼠体重、血糖, 用电子测痛仪测定机械痛阈，采用ⅡT336型甩尾足底 测试仪测定热痛阈。每组测定完上述指标后随机取6只大鼠，用10%的水合氯醛 按200mg/kg腹腔内注射麻醉SD大鼠，快速取L4-6节段脊髓放入液态氮中保存。 通过PCR基因扩增仪用RT-PCR 法测定大鼠L4-6脊髓TLR4的相对表达量，ELISA 法检测脊髓TNF-α、IL-1β的变化，用SPSS17.0统计结果。 结果 与制模前相比，DM 组腹腔注射 STZ 后 1w、2w 、3w、4w 、6w、8w 时 血糖浓度显著升高，C 组血糖无明显变化；DM 组腹腔注射STZ 后体重逐渐下降， C 组体重逐渐增加。DM 组机械痛阈在2w 、3w、4w 呈现逐渐下降趋势， 4w 时 降至最低并持续至8w,显著低于C 组(P0 ．05) ； DM 组热痛阈在4w 明显降低 并持续至8w，低于C 组 （P0 ．05)， 但8w 时热痛阈较前又有回升，比6w 时 显著升高(P0 ．05). DM 组L4-6 脊髓TLR4 表达出现上调，并且 1w、2w 、3w、 4w 呈现逐渐上升趋势，6w、8w 又呈现逐渐下降趋势,1w、2w 、3w、4w 、6w 时 TLR4 表达均高于C 组(P0 ．05)，其中在4w 时上升至最高；DM 组L4-6 脊髓 TNF-α 表达在 1w、2w 、3w、4w 、6w、8w 比C 组显著升高(P0 ．05) ；DM 组 3 L4-6 脊髓IL-1β 在 1w、2w 、3w、4w 、6w、8w 比C 组显著升高(P0 ．05) 。将 DM 组所有相对定量检测的L4-6 脊髓 TLR4 表达与其处死前所测得的机械痛阈 和热痛阈进行 Spearman 线性相关性分析显示：DM 组0w、 1w、2w 、3w、4w 脊髓 TLR4 表达与机械痛阈呈负相关(r=-0 ．941)(P0 ．05) ，与热痛阈负相关 (r=-0.907)(P0 ．05) ；6w、8w 脊髓TLR4 表达与机械痛阈和热痛阈无相关性。将 DM 组所有相对定量检测的L4-6 脊髓TLR4 表达与TNF-α 和IL-1β 进行Spearman 线性相关性分析显示：DM 组0w、 1w、2w 、3w、4wTLR4 表达与TNF-α 呈正 相关(r=0 ．98) (P0 ．05)，与IL-1β 呈正相关(r=0 ．87) (P0．05) ； 6w 、8w 脊 髓TLR4 表达与TNF-α 和IL-1β 无相关性。将DM 组相对定量检测的L4-6 脊髓 TNF-α 和IL-1β 的表达与机械痛阈、热痛阈进行Spearman 线性相关性分析显示: DM 组0w、 1w、2w 、3w、4w 、6w、8w 脊髓TNF-α 表达与机械痛阈成负相关 (r=-0.929) (P0 ．05)，与热痛阈成负相关(r=-0.786) (P0 ．05) ；IL-1β 表达与机 械痛阈成负相关(r=-0.750) (P0 ．05)，与热痛阈成负相关(r=-0.643) (P0 ．05) 。 结论 糖尿病大鼠早期脊髓TLR4 表达增高导致炎性细胞因子TNF-α 和IL-1β 的释放，炎性细胞因子TNF-α 和IL-1β 是引起糖尿病大鼠神经病理性疼痛的重要 因素，因而TLR4 表达增高与糖尿病大鼠早期神经病理性疼痛相关。 【