TRIM67对胃癌细胞增殖及凋亡影响机制的研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………5 英文缩写……………………………………………………………………9 研究论文 TRIM67 对胃癌细胞增殖及凋亡影响机制的研究 前言……………………………………………………………………10 材料与方法……………………………………………………………12 结果……………………………………………………………………20 附图……………………………………………………………………22 讨论……………………………………………………………………28 结论……………………………………………………………………35 参考文献………………………………………………………………36 综述 TRIM 蛋白家族的结构功能及其与肿瘤的关系…………………40 致谢…………………………………………………………………………51 个人简历……………………………………………………………………52 万方数据 中 文 摘 要 TRIM67 对胃癌细胞增殖及凋亡影响机制的研究 摘 要 目的: 三结构域蛋白67 （TRIM67 ）是三结构域蛋白家族的其一个成 员，它在胃癌中处于沉默或下调的状态，目前在胃癌中未见相关文献，其 作用机制尚不明确。我们通过实时荧光定量聚合酶链反应 （Real-time PCR ）、蛋白质印迹法 （Western blot ）及流式细胞术等相关实验技术验证 TRIM67 与胃癌细胞的生长、凋亡等之间的关系。主要阐明该基因在胃癌 中作为一个肿瘤抑制基因的生物学功能。 方法: 1 选取21 对香港中文大学威尔斯亲王医院的胃癌组织和癌旁正常组 织样本为实验对象，运用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR ）测 定TRIM67 基因在这21 对样本中的表达水平，并分析胃癌组织和癌旁正 常组织中TRIM67 的表达水平差异。 2 运用相关实验技术，①反转录聚合酶链反应 （reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR ）验证TRIM67 在胃癌细胞株 （AGS 、 BGC823 、MGC803 、MKN1 、MKN45 、MKN74 、SNU1、SNU638 ）中的 表达水平；②运用亚硫酸氢盐测序法 （bisulfite genomic sequencing, BGS ） 对相关胃癌细胞株中TRIM67 启动子序列进行检测；③应用2uM 浓度的 5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine, 5-Aza ）对胃癌细胞株（AGS 、 BGC823 、MKN45 、SNU1、SNU638 ）去甲基化处理96 小时后，通过RT-PCR 检测细胞株中的TRIM67 的表达水平，并以未用5-Aza 处理的对照组进行 对比。 3 构建 pcDNA3.1-2×Flag-TRIM67 重组质粒并转染胃癌细胞株 AGS 和MKN1 ，以pcDNA3.1-vector 为对照组，G418 筛选出AGS 和MKN1 稳定细胞株后，分别以 mRNA 和蛋白质水平检测该胃癌细胞株过表达 TRIM67 后的表达。运用MTT 实验进一步表明TRIM67 对胃癌细胞株细 胞生长活力的影响，并通过软琼脂克隆形成实验验证该基因对胃癌细胞生 长及集落形成能力的作用情况。以 TRIM67 表达较高的胃癌细胞株 MKN74 为基础，应用shRNA （short hairpin RNA