5、鼠解剖采样及血清、培养分离检验.pptVIP

鼠解剖采样及血清、培养分离检验技术 温州市疾病预防控制中心 一、鼠疫菌概况1.鼠疫菌的发现： 1894年香港鼠疫大流行时，日本学者北里和法国学者耶尔森同时从尸体的淋巴结发现了这种致病菌，同年9月被命名为鼠疫杆菌。 2.鼠疫菌的地位： 鼠疫菌在分类学上属真细菌目、肠杆菌科、耶尔森氏菌属（Genus yersinia）。本属中的细菌除鼠疫杆菌(Yersinia pestis)外，还有假结核杆菌（Yersinia Pseudotuterculosis）和小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica）。 鼠疫杆菌的生物学特性 1.形态和染色 典型的鼠疫杆菌短而粗、两极浓染、两端钝园、中间澎大， 几乎成卵园或椭园形，菌体长约1.5～1.8微米，宽0.5～0.7微米。有荚膜、无鞭毛、无芽胞。革兰氏染色阴性。但鼠疫菌形态表现上具有明显的多形性变化，即形态很不一致，如卵球型或长短不一的长杆形菌细胞等。 用病人材料，死于鼠疫的人尸和动物尸体的新鲜脏器制备的涂片，可见到两端钝园，两极浓染的典型鼠疫杆菌，呈散在或小堆，偶见链状排列。在陈旧性病灶及腐败材料中，常见到菌体澎大和着色不良的球形菌影及其他变形的鼠疫杆菌。在压印标本中，可以看到吞噬细胞内外有鼠疫杆菌。此点对于鉴别杂菌污染材料有很大的价值，因为动物死后，污染的杂菌不会被吞噬细胞所吞噬。 培养特性 鼠疫杆菌为需气，亦为兼性厌气性的细菌，故非绝对需气性菌。在氧气充足时，固然发育较好。 鼠疫杆菌能在普通培养基上生长发育。 培养所需温度在0～45℃之间均可发育，不过以25～30 ℃之间的温度来培养发育较佳,而以28～30℃培养为最好，较37℃时丰盛五倍， 至于在血液琼脂平板上则以37℃为宜。 培养基的酸碱度在PH5.8～8.0均可发育，但以6.9～7.1为最适宜。 鼠疫杆菌在普通琼脂平碟上，经过24小时即能形成肉眼可见的薄薄一层淡灰色的微小菌落.直径0.1～0.2毫米，有光泽、园形、中心稍凸出、 无色。显微镜下观察可见碎玻璃片样透明幼小菌落。培养48小时后，用显微镜观察时，能很清楚的看见非常透明而不整齐的化边分布在菌落中心凸出部的周围。菌落中心部呈颗粒状，或者甚至呈小丘起伏状，并呈淡黄色或稍呈黄褐色。花边带白色，并且几乎是透明的。于28～30℃培养时菌落相当干燥，容易用接种环从琼脂表面将菌落取下来。 鼠疫菌的营养需求 鼠疫菌是需氧或兼性厌氧的细菌，它在发育过程中不需要更多的氧，在培养基中添加血液、血红素或其他还原物质，改变培养基中的氧化还原电位以利鼠疫菌的发育，且血红素又是合成呼吸酶的材料，有刺激鼠疫菌生长的作用。 近年来不断发现鼠疫菌在自然条件和实验条件下，都能发生变异而形成营养缺陷型和低营养型，其中又以氨基酸营养缺陷型多见。 鼠疫检验常用的培养基 1.基础培养基 常用的普通营养琼脂、胰酶消化液琼脂(即赫金格尔琼脂)，其中以胰酶消化液琼脂为优。目前，国内青海省地方病防治所有商品化的干粉可供选择。 2.敏感培养基 所谓敏感培养基，就是在基础培养基内，加入某种鼠疫菌生长刺激剂而成的培养基。最常用的刺激剂有亚硫酸钠和血液。亚硫酸钠一般多预先配成2.5％的水溶液，临用时按每100毫升基础培养基加入1 毫升使培养基内亚硫酸钠的含量达到0.025％既可；血液一般习惯用家兔溶解血， 但以脱纤维兔溶解血更佳，用量以培养基内含量达0.1--1％为合宜，于培基灭菌后冷至45℃左右时加入，混匀后倾注平皿。 3.选择培养基 为了在腐败材料中分离出鼠疫菌，在基础培养基内，加入某种能抑制杂菌生长，但又无害于鼠疫菌生长的物质而制成的培养基称之为选择培养基。常用的是含1/10万--1/20万的龙胆紫或结晶紫的培养基它能压制变形菌的繁殖及一般腐败菌的发育，尤其是在抑制革兰氏阳性细菌的生长上有一定的作用，而鼠疫菌在该培养基上24小时后仍可看到完整的菌落。 4.选择敏感培养基 在优质的基础培养基内，同时加入能刺激鼠疫菌生长的刺激剂及抑制其他杂菌生长的物质之培养基称为选择敏感培养基。这一类培养基是鼠疫细菌检验工作中最常用的，它包括龙胆紫溶解血培养基、龙胆紫亚硫酸钠培养基。 所谓优质培养基就是培养基内氨基酸的含量丰富而且有鼠疫菌生长所必需的种类，氨基氮含量不能低于50mg％，同时还需要有适当的刺激剂，鼠疫菌的最小接种量可以少到10个菌体也能长出菌落来。另一方面培养基酸碱度必需准确，PH6.9～7.1，培养基也要求新鲜润湿，要有一定的厚度，即要有平皿厚度的1/3 左右。 鼠疫菌的毒素 鼠疫菌毒性物质在鼠疫菌的细胞内部及荚膜中均可发现，现已证明鼠疫菌有两种毒素