实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 一、实验目的 1、掌握光学 .docVIP

实验一 显微镜的使用及微生物形态的观察 一、实验目的 1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养。 2、观察细菌、放线菌和芽孢细菌的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验原理 （一）显微镜的构成：镜筒、目镜、转换器、载物台、镜臂、调节器、集光器、反光镜 （二）显微镜使用和保护 1、低倍镜的使用 2、高倍镜的使用 3、油镜的使用 4、显微镜的保护 三、教学重点与难点 教学重点：显微镜的构成，显微镜使用和保护。 教学难点：显微镜使用和保护。 四、实验学时数和学时分配 实验学时数：2学时 学时分配：1、检查学生实验预习情况—5分钟；2、教师讲解本次实验内容—30分钟；3、学生分工协作开始实验—40分钟；4、学生讨论，处理实验结果—20分钟；5、教师对本次实验情况进行点评，布置下次实验内容—25分钟。 五、实验准备 生物显微境、载玻片、盖玻片、擦镜纸、微生物标本。试剂（略） 六、实验过程 1、低倍镜观察 2、高倍镜观察 3、油镜观察 4、用油镜观察各种菌类 七、思考题 使用油镜前为什么要先用低倍和高倍镜检查？ 实验二 培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1、熟悉玻璃器皿的包扎方法。 2、掌握培养基的制备方法。 3、掌握高压蒸汽灭菌技术。 培养基是微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。通常根据微生物生长繁殖所需要的各种营养物配制而成。其中含水分、碳化合物、氮化合物、无机盐和生长因子等，这些营养物可提供微生物碳源、能源、氯源等，组成细胞及调节代谢活动。按培养目的不同，或微生物种类不同可配成各种培养基。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求将培养基调到合适的pH值范围。 教学重点:掌握普通光学显微镜的结构和样品制作和明视野普通光学显微镜中油镜的正确使用方法；教学难点:理解 四、实验学时数和学时分配 实验学时数：2学时 学时分配：1、检查学生实验预习情况—5分钟；2、教师讲解本次实验内容—30分钟；3、学生分工协作开始实验—40分钟；4、学生讨论，处理实验结果—20分钟；5、教师对本次实验情况进行点评，布置下次实验内容—25分钟。 五、实验准备 器材：pH试纸、培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养基分装器、高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、纱布、棉花、牛皮纸(或报纸)、玻璃棒、天平、牛角匙、记号笔。试剂（略） 1、玻璃器皿的洗涤和包装 2、培养基的制备 3、灭菌 1、培养基是根据什么原理配制的？ 2、为什么湿热灭菌比干热灭菌优越？  微生物的染色 一、实验目的 1、学习微生物的染色原理、染色的基本操作技术 2掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。 微生物(尤其是细菌)的机体是无色透明的，在显微镜下，由于光源是自然光，使微生物体与其背景反差小，不易看清微生物的形态和结构，若增加其反差，微生物的形态就可看得清楚。通常用染料将菌体染上颜色以增加反差，便于观察。 pH＝2～5之间，故细菌在中性(pH＝7)、碱性(pH＞7)或偏酸性(pH＝6－7)的溶液中，细菌的等电点均低于上述溶液的pH值，所以细菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。碱性染料有美蓝、甲基紫、结晶紫、龙胆紫、碱性品红、中性红、孔雀绿和蕃红等。 革兰氏染色法是细菌学中很重要的一种鉴别染色法。它可将细菌区别为革兰氏阳性菌和 革兰氏阴性菌两大类。它的染色步骤如下：先用草酸铵结晶紫染色，经碘一碘化钾(媒染剂)处理后用乙醇脱色，最后用蕃红液复染。如果细菌能保持草酸铵结晶紫与碘的复合物而不被乙醇脱色，呈紫色者叫革兰氏阳性菌。被乙醇脱色用蕃红液复染后呈红色者为革兰氏阴性菌。 教学重点：革兰氏染色的方法以及微生物染色的原理。 教学难点:革兰氏染色中操作环节。 —5分钟；2、教师讲解本次实验内容—30分钟；3、学生分工协作开始实验—40分钟；4、学生讨论，处理实验结果—20分钟；5、教师对本次实验情况进行点评，布置下次实验内容—25分钟。 五、实验准备 显微镜、香柏油(或液体石蜡)、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载玻片、酒精灯、枯草杆菌、大肠杆菌。试剂（略） （一）细菌的简单染色 涂片干燥固定染色水洗吸干镜检 1、取大肠杆菌和枯草杆菌(均以无菌操作)分别做涂片、干燥、固定。 2、用草酸铵结晶紫染液染1分钟，水洗。 3、加革氏碘液媒染1分钟，水洗。 4、滴加95％乙醇脱色，随即水洗。 5、用蕃红染液复染2分钟，水洗。 6、用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下观察。 必须严格掌握乙醇脱色程度，如果脱色过度阳性菌被误染为阴性菌，若脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。 八、思考题 1、微生物的染色原理是什么? 2、革兰氏染色法中若只做1—4的步骤而不用蕃红染液复染，能否分辨出革兰