生物化学静态部分总结.ppt

* * * * * * * The human genome has genes for three closely related chloride-bicarbonate exchangers, all with the same predicted transmembrane topology. Erythrocytes contain the AE1 transporter, AE2 is prominent in liver, and AE3 is present in plasma membranes of the brain, heart, and retina. Similar anion exchangers are also found in plants and microorganisms. * glucose * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * DNA双螺旋通过扭曲和折叠所形成的特定构象。 包括： 不同二级结构单元间的相互作用 单链与二级结构单元间的相互作用 DNA的拓扑特征 超螺旋是DNA三级结构的主要形式。 （三）DNA的三级结构 环形DNA 一条链断裂：开环分子（ocDNA) 两条链断裂：线型分子 (linear DNA) 1、?? 环状DNA的三种典型构象 P491 图13-12 （1）、? 松弛环形DNA （2）、? 解链环形DNA （3）、 正超螺旋与负超螺旋DNA 2、 三种环形DNA的拓扑学特性 ①连环数（linking number , L） DNA双螺旋中，一条链以右手螺旋绕另一条链缠绕的次数 ②扭转数（twisting number , T） DNA分子中的Watson-Crick螺旋数目，以T表示 ③超螺旋数（缠绕数 , writhing number , W） 连环数（L） 缠绕数（T） 扭曲数W 松驰环 25 25 0 解链环 23 23 0 超螺旋 23 25 -2 L=T+W ④比连环差（specific linking difference , λ） 表示DNA的超螺旋程度(Superhelix density) λ=（L—L0）/L0 = 每一圈初级螺旋（10bp，360°）出现超螺旋数 L0是指松驰环形DNA的L值 RNA通常是单链线形分子 自身回折形成局部双螺旋（二级结构） 进而折叠（三级结构） 多数形成核蛋白复合物（四级结构）， 如核糖体、拼接体、编辑体等。 RNA病毒是具有感染性的RNA复合物 四、RNA的高级结构 RNA中的碱基配对原则 A-U G-C A-U G-C 双螺旋区 核酸物理化学性质 OD260的应用： 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚，降低 3.判断DNA是否变性 四、核酸的变性、复性与杂交 (一) 核酸的变性（denaturation） 1、DNA的变性： 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 某些理化因素破坏了氢键和碱基堆积力， 使核酸分子高级结构改变、理化性质及 生物活性发生改变。 不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变 2、变性的实质 降解：核苷酸骨架上3’，5 ’-磷酸二酯键的断裂 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 4、变性后理化性质变化 RNA变性：从螺旋到线团之间的转变 RNA的变性引起的性质变化没有DNA明显 DNA变性 指增色效应达50%时的温度 一般DNA Tm 值在85 - 90 ?C之间 Tm：DNA变性时，OD260达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度或融解温度(Tm)。 大小与G+C含量成正比。 (二)核酸的复性（renaturation） 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链重新缔合成双链——复性。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 分子量越大复性越难； 浓度越大，复性越容易