茜素红S荧光猝灭法测定壳聚糖含量.pdfVIP

茜素红s荧光猝灭法测定壳聚糖含量 高贵珍“2，焦庆才“，丁一磊1，陈 雷 1．南京大学生命科学学院．药物生物技术国家重点实验室，江苏南京210093 2．宿州师范专科学校生化系，安徽宿州234000 摘要在pH5．0的NaAc_HAc缓冲液中壳聚糖对茜素红s的荧光强度具有明显的猝灭作用，且猝灭程度 Fo／F与加入的壳聚糖浓度成线性关系，据此建立一种测定壳聚糖含量的荧光猝灭法。确定了最佳测定条 件，线性回归方程为F0／F=一0．43837+0．436 27c(rng·L。1)，线性范围为0～16．667H19·L～，r=0．996， 检测限为0．473 n】g·L；平均回收率为100．印％，测定了样品中壳聚糖的含量，并考察了干扰因素对测定 的影响。采用该方法可测定复杂样品中微量壳聚糖古量。 主墨词茜紊红；壳聚糖；荧光猝灭法 中重分类号：Q539文献标识码：A 文章编号：1000．0593(2003)05一0895—04 壳聚糖是含有游离氨基阳离子生物多糖，壳聚糖及其衍 乙酰度踟％。cTs贮液(1000Ⅱ珥·L。1)的制备：称取cTs 生物是重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、抗凝血、抗血栓、 O．1g溶于100n1L1％HAc水溶液中。操作液(25rIlg·L1)： 降血脂和增强免疫力等功能“。5J。可作为医药保健品、食品、 吸取贮液2．5tnL到100mL的容量瓶中，稀释至刻度。 nd· 化妆品等的添加剂及制备人造皮肤和手术缝合线等的重要原 茜素红s(ARs)购自上海试剂三厂，贮液(2×10-2 5 料。因而，在生物医学、环境科学、农业、食品、化妆品等领 L。1)的制备：称取0．720 rnL蒸馏水。操作 gARS溶于100 域都有着广阔的应用前景。近几年来，各国对壳聚糖及其衍 液(1×10。3moI·L-1)：取5mL贮液定容至100H1L。 生物的研究越来越关注，许多国家都致力于壳聚糖产品的开 反应体系的pH由0．2rnol·L。1的NaADHAc缓冲液控 发并有产品上市，但到目前为止壳聚糖含量测定仍然采用酸 制，其他试剂均为分析纯或优级纯，实验用水为二次蒸馏 永解间接比色法”’进行样品分析，此方法操作烦琐，不适合 水。 复杂样品中微量壳聚糖含量的分析检测。茜紊红s(ARs)是1．2实验方法 m×100 一种阴离子染料，有关茜素红s荧光猝灭法测定蛋白质的研 在一系列12 rmn试管中，按先后顺序分别加 究已经有报道”j，但其作为多糖分析试剂的荧光光度法研究 入茜紊红s、NaAc-HAc缓冲液、壳聚糖和其它试剂，加水定 尚未见报道。本实验室在对茜素红与壳聚糖相互作用及含量 容，播匀。室温下以蒸馏水为参比扫描吸收光谱、荧光光谱， 或在激发波长470 测定的分光光度法研究的基础上”J，又用荧光光度法对其进 nm和发射波长510妯·处测定其荧光强度 F，同时在相同条件下测茜素红s的荧光强度R。 行了研究。本文根据壳聚糖在pH5．0的N如HAc缓冲液中 对茜素红s的荧光强度具有明显的猝灭作用，且猝灭程度与 壳聚糖浓度成线性关系，建立了一种具有高灵敏度的简便快 2结果与讨论 速测定壳聚糖含量的荧光光度法，采用该方法可以测定不同 复杂样品中微量的壳聚糖。 2．1激发和发射光谱