鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定.pdfVIP

第46卷 第6期 复旦学报(自然科学版) Vl01．46 No．6 20o7年12月 Journal ofFudanUniversity(NaturalScience) Dec．2007 文章编号：0427-7104(2007)06．0930．07 鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定 王 鑫，黄 兵，赵其平，韩静芳，韩红玉，董 辉，姜连连 (中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海200232) 摘 要：为了建立鸡球虫纯株，选用l～5日龄雏鸡，采用琼脂块单卵囊分离法对实验室保存的6种ll株鸡球虫 进行纯化，并选用2周龄雏鸡，对每个虫种／株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定．结果单卵囊接种179 只，获得单卵囊分离物42个，单卵囊分离成功率23．46％；对11个单卵囊分离物，通过测定寄生部位、潜在期、孢 子化卵囊大小、形状指数(长／宽)、孢子囊大小、最短孢子化时间等指标，鉴定出1个分离物为堆形艾美耳球虫 (FJmeria acervulina)、2个分离物为柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)、6个分离物为巨型艾美耳球虫(E．maxi~rla)、1 个分离物为变位艾美耳球虫(E．mivati)、1个分离物为毒害艾美耳球虫(E．necatrix)．本研究表明琼脂块单卵囊 分离法简便易行、成功率较高，同时提示实验室保存的布氏艾美耳球虫(E．brunetti)被柔嫩艾美耳球虫污染． 关键词：鸡；球虫；艾美耳球虫；单卵囊 中图分类号：S 858．312．723 文献标识码：A 鸡球虫病是由艾美耳科(Eimeriidae)球虫引起的一种严重危害养鸡业的肠道寄生性原虫病，其分布 广、危害大，可以说有鸡的地方就有球虫，每年给我国养鸡业造成数十亿元损失Ll J．据统计，全世界已报道 的鸡球虫有15种[ ，我国报道的有11种，其中超过20个省市区报道的有7种L3J．在养鸡场，球虫多为几 个种混合感染，直接来源于现场鸡肠道或粪便的球虫均为混合种．即便实验室建立的单一纯种，在经反复 回鸡传代后，也可能因某一环节控制不严，造成球虫纯种被其他虫种污染而变成混合种．因此，建立球虫纯 种或定期对实验室保存的虫种进行单一种纯化和种类鉴定，是保障各项研究结果准确、可靠的前提和基 础． 鸡球虫单一种纯化最常用的方法是单卵囊分离法l4 J，对于生活史比较特殊的虫种(如毒害艾美耳球 虫)可以使用裂殖子盲肠接种法[ _6]，这些方法简便易行，分离纯种的成功率可达30％以上L7培J．本文利用 单卵囊分离法对本实验室长期保存的鸡球虫6种11株进行了分离纯化，并对部分单卵囊纯化的虫种进行 了重新鉴定，为纯种／株的建立和进行相关生物学实验奠定了基础． 1 材料与方法 1．1 试验动物 AA雏鸡，购自上海市南汇区某鸡场．出壳后运回实验动物房，在严格消毒的无球虫环境中饲养，其用 具、饲料等均经80℃2 h处理．单卵囊感染用雏鸡为1 N5日龄，卵囊增殖和种类鉴定用雏鸡为2周龄．试 验前检查雏鸡粪便，确定为无球虫感染． 1．2 试验虫种 单卵囊分离用虫种，为本实验室保存并在试验前1个月内繁殖的6种11株鸡艾美耳球虫．见表1．每 个虫株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定． 1．3 试验方法 1．3．1 单卵囊分离与感染 收稿日期：2007 06—12 基金项目：国家科技基础条件平台建设项目(2005DKA21104) 作者简介：王 鑫(198卜 )，女，硕士研究生；通讯联系人黄 兵，男，研究员，E-mail：huangbing232@163．oorr1． 第6期 王 鑫等：鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定 931 1．3．1．1琼脂块的制作 称取1 g琼脂糖，置于三角烧瓶中，加入100 mL蒸馏水，搅匀、煮沸，用吸管吸 取琼脂液浇注于载玻片上，厚度2～3 rD．1Tl，静置凝固后，用刀片将琼脂糖切成约4 rD．1Tl×4 rD．1Tl的小块，再 将小块分散排列到另一块载玻片上，待用． 表1 单卵囊分离虫株 Tab．1 Species／strains