大黄素对TLR4基因介导的肾小管上皮细胞LPS信号转导的机理研究.pdfVIP

附图„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32 文献综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„33 3 万方数据 中文摘要 大黄素对TLR4 基因介导的肾小管上皮细胞LPS 信号转导 的机理研究 目的 观察在脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS ）诱导下，肾小管上皮细胞对天然免 疫Toll 样受体4 （Toll-like receptor 4 TLR4 ）和信号转导分子髓样分化因子88 （Myeloid differentiation factor 88,MyD88 ）、核转录因子κB ( Nuclear factor －kappa B,NF-κB) 以及下 游产物白细胞介素6 （Interleukin －6，IL-6 ）、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α， TNFα) 的反应，阐述在肾固有细胞中存在与其它炎症细胞相同的信号转导途径，进一步 证实肾固有细胞参与肾脏免疫过程；同时探讨大黄素在上述环节中的作用及途径。 方法 原代培养的BALB/C 小鼠肾小管上皮细胞，模型组用100ng/ml 的LPS 诱导， 治疗组在LPS 诱导的同时，分别用0.1、0.2、0.4μg/ml 浓度的大黄素干预，于24h 后分 别提取细胞总RNA 及蛋白，用逆转录－聚合酶链反应（Reverse transcription-polymerase chain reaction ，PT-PCR ）检测TLR4、MyD88 、NF-ΚB 以及TNFα、IL-6 mRNA 的表达， 并用免疫蛋白印迹（Western-blotting ）检测肾小管上皮细胞NF-κB 蛋白的表达。 结果 正常肾小管上皮细胞可见TLR4、MyD88 、NF-κB 以及TNFα 、IL-6 mRNA 低 表达，用 LPS 刺激后，各因子表达均明显上调（与正常组比，P0.05 ）,不同浓度大黄 素干预后则TLR4 、MyD88 、NF-κB 以及TNFα、IL-6 mRNA 表达均明显下降（与模型 组比较，P0.05 ），下降程度与大黄素浓度相关，部分存在一定的量效依赖关系； Western-blotting 法显示LPS 诱导后，转入核内的NF-κB 明显增加（P0.01 ），而大黄素 干预后则活性NF-κB 显著减少（P0.05 ）。 结论 肾小管上皮细胞本身能够表达TLR4、MyD88 、NF-ΚB 以及TNFα 、IL-6 ；通 过TLR4 介导，LPS 可以诱导NF-ΚB 活化，引起促炎症细胞因子基因的转录，导致TNFα、 IL-6 失控性表达，产生相关的免疫炎症反应；大黄素能够抑制TLR4 基因介导的肾小管 上皮细胞LPS 信号转导，减轻肾脏局部免疫炎症反应、保护肾功能。 主题词 大黄素，脂多糖，TLR4 信号转导，NF- κB，肾小管上皮细胞 4 万方数据 ABSTRACT The study to the mechanism of Emodin to TLR4-mediated LPS signal transduction in renal tubular epithelial cells Objective To observe the LPS-induced reaction of renal tubular epithelial cells to Toll-like receptor 4 ( TLR