稻瘟病菌自噬基因ATG1的功能研究论文.pdfVIP

稻瘟病菌自噬基因ATGl的功能研究 刘小红1～，卢建平1～，董波2，叶丽丹1～，闵航2，林福呈1’ (1．浙江大学华家池校区生物所，杭州310029：2．浙江大学华家池校区生命科学院， 杭州310029：+E-mail：fuchenglin@zju．edu．cn) 关键词：细胞自噬；稻瘟病菌：ATGl基因；缺失突变 细胞自噬(autophagy)是真核生物中普遍存在的过程，通过降解细胞内的 长寿命蛋白质和细胞器，产生氨基酸以维持细胞在缺乏营养时的生存。细胞自噬 的一个显著特征是形成双层膜的自噬泡，自噬泡可以包裹细胞质、大型的细胞器， 然后与溶酶体结合，并分解产生生物体可以利用的大分子。研究表明，细胞自噬 与生物体的发育、分化相关，尤其是在低等生物中，受到环境胁迫因子的影响可 以诱导细胞自噬现象的产生。自噬影响酵母的分化和产孢过程；影响线虫的发育； 在植物中，缺失自噬过程的基因加速植物的衰老；饥饿条件下，缺失自噬基因后 的家鼠容易死亡。 在很多植物病原真菌中，饥饿胁迫是诱导基因表达的关键因素。就稻瘟菌而 言，饥饿是诱导分生孢子形成芽管，分化成附着胞的关键因素。而附着胞是稻瘟 病菌生活史中短暂存在的一个阶段。附着胞积累大量的甘油，产生巨大的膨压， 以此穿透寄主叶片表皮。 在成熟附着胞的差减文库中找到～绷粥_『基因(细胞自噬相关基因)的EST 着胞形成阶段有可能发挥重要的作用。通过LDPCR分离到稻瘟病菌的ATGl基 因。ATGl是一个108Kda的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，具有982个氨基酸。通过蛋 白序列比对，发珊TGl基因保守性很高，稻瘟病菌的ATGl基因与酵母、人、家 鼠和线虫的同源性很高。利用基因缺失的方法研翘TGl基因的功能，得到两个 失引起的，构建互补载体pBAR-ATGl，得到基因型和表型都恢复的突变体HB24。 通过Southern 变体。 149 l和恢复型HB24菌丝浓密： 基因缺失突变体Aatgl菌丝稀疏，而野生型Guyl Aatgl突变体的产孢量下降，仅为野生型的1／15：孢子萌发延迟；Aatgl突变体的 附着胞形成率没有变化，但是成熟附着胞的膨压显著下降。Aatgl突变体的致病 性丧失，在感病品种CO．39和大麦上都没有致病性；接种到磨损的寄主叶片表面， Aatgl突变体可以侵染，但侵染程度很弱。 ATGl基因是细胞自噬过程的诱导因子。在营养缺乏培养基中，Aatgl突变体 1中， 的自噬过程被阻断，在细胞质和液泡中均不能形成自噬泡。而在野生型Guyl 液泡和细胞质中有大量的自噬泡积累。进而对Aatgl突变体在营养缺乏条件下的 1生长速度没 生长进行观察，发现尽管在正常条件下Aatgl突变体和野生型Guyl l差 有差别，但是在营养缺乏培养基上，Aatgl突变体的生长受到抑制，与Guyl 别显著。此结果说明，ATGJ基因影响到稻瘟病菌在饥饿条件下的生长。 综上所述，稻瘟病菌ATGl基因是一个与病菌的产孢量，孢子萌发，附着胞 膨压和致病性密切相关的基因；并勘TGl基因缺失，影响到稻瘟病菌的自噬过 程，使其不能忍耐饥饿。