小麦多酚氧化酶（PPO）基因的分类及非同义cSNP对籽粒PPO活性的影响.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgricultural Biotechnology 2007，1 5 (6)：970～975 · 研究论文· 小麦多酚氧化酶(PPO)基因的分类及非同义 cSNP对籽粒PPO活性的影响木 王晓波，马传喜料，司红起，何贤芳 (安徽农业大学农学院，合肥230036) 摘要：小麦(Trifletun aesfivann)籽粒多酚氧化酶(PPO)活性是影响面团褐变的主要原因。通过对NCBI上注册的小麦PPO 基因序列的搜索与比对后发现，现有的小麦PPO基因按表达方式可分为两大类(I和Ⅱ)，其中第Ⅱ大类的PPO基因与小麦籽 粒PPO活性密切相关，第Ⅱ大类第i小类中的PPO基因可能位于小麦2A和2D以外的染色体上，可作为改良面团色泽的侯 选基因。通过对具有完整开放阅读框(ORF)的4条PPO基因比对后发现，位于小麦2D染色体长臂上的PPO基因(PPO．2D)存 在丰富的等位变异，等位基因间有94个单核苷酸变异(SNP1，其中发生在编码区的SNP(cSNP)有80个，这些cSNP中有36个 影响到基因编码的氨基酸序列，属非同义cSNP。在非同义cSNP处，设计引物STS．H，对 l30个已连续测得两年PPO活性的小 麦品种进行PCR扩增，结果发现STS．H在大部分低PPO活性品种中没有扩增出目标片段(a)，而大部分高PPO活性品种可以 扩增出460 bp的目标片段 (b)。方差分析表明，a．b两种类型品种的PPO活性均值差异达极显著水平 (P0．01)，说明非同义 cSNP对小麦籽粒PPO活性有重要影响。与STS01引物(低PPO活性显性标记)tt较后发现，STS．H与STS0l是一对互补标记， 根据STS01和STS．H引物各自的特点，研究了能同时扩增两对引物的多重PCR反应体系。 关键词：小麦；基因；多酚氧化酶；分子标记；多重PCR 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1006．1304(2007)06．0970．06 Classification of Wheat Polyphenol Oxidase(PPO)Genes and Effect ofNon—synonymous cSNP on Kernel PPO Activity WANG Xiao—bo，MA Chuan—xi ，SI Hong—qi，HE Xian—fang (AgronomySchool ofAnhuiAgricultural University,Hefei230036,China) Ablmlct：Polyphenol oxidase(PPO)activity is highly related to the undesirable browning of wheat—based end products．In this study，wheat(Trificum aestivmn)PPO sequences(mRNA)were searched／blasted in NCBI and aligned using DNAMAN software． The resul~showed that me wheat PPO genes could be divided into two clusters(I and II)and three genes(i)of the II cluster did not seem on chromosomes 2A and 2D．Ninety—four single nucleotide polymorphisms(SNP)were detected between two haplotypes of PPO gene on chromosome 2D．Eighty SNPs of them were found in coding region (coding SNP)and 36 SNPs were non—synonymou