采用多重PCR技术检测转基因番木瓜华农一号.pdfVIP

1—1802／ts．201506031 DOI：10．13995／j．cnki．1 采用多重PCR技术检测转基因番木瓜华农一号+ 白卫滨1，曹春廷1，朱翠娟1，文罗娜1，吴贤权1，欧仕益1，孙建霞21 1(暨南大学食品科学与工程系，广州广东，510632)2(广东工业大学轻工化工学院，广东广州，510006) 摘 要 为了建立针对转基因番木瓜华农一号简便、快速、高灵敏度的多重PCR技术，用DP305植物基因组试 剂盒方法提取3种转基因番木瓜(Event55-l、GM—YK和华农一号)和非转基因番木瓜(台农2号)样品DNA，以 木瓜蛋白酶基因(Papain)作为内参基因，进行了单重PCR技术引物特异性验证，多重PCR方法条件摸索及引物 别103、166、213、281、369 bp，说明引物具有特异性；建立了检测转基因番木瓜华农一号的五重PCR检测技术，检 测限为0．2ng。 关键词 转基因番木瓜；华农一号；通用引物；多重PCR 目前，全世界范围内很多种转基因作物已经商业 号，可达到0．05％的检测限。韩建勋等Ⅲ1用实时荧 化，如大豆、玉米、棉花、油菜以及番木瓜等，而对转基 光定量PCR对包括华农一号在内的4种转基因产品 因产品的安全性问题，还存在争议。因此，部分国家 进行研究，检出了台湾中兴大学研发的4个转基因 为保障本国消费者知情权和贸易壁垒，要求对转基因 品系。 产品进行定性或定量标识。我国目前对转基因产品 但这些研究都只限于转基因番木瓜华农一号的 采取强制定性标识政策，而定性标识的技术基础是转 品系检测，并不能同时对多种转基因番木瓜品种进行 基因成分检测方法的研究。目前，转基因检测方法有 检测。因此本研究以华农一号为研究对象，通过对华 PCR方法…、酶联免疫吸附法(ELISA)¨1、Western杂 农一号及另外2种已获批准商业化种植的抗病毒转 交法¨1、近红外光谱法¨1。应用最为广泛的方法为 基因番木瓜(Event PCR方法，已经应用于多种转基因产品的检测，如土 引物及外源基因的设计、单重及多重PCR扩增技术 豆‘5“]、玉米‘7“0|、大米‘11。121等。 研究，旨在建立针对转基因番木瓜华农一号转基因成 番木瓜是一种亚热带水果，但由于易受环斑病毒 分的简便快速、高灵敏度的多重PCR技术。 的感染而影响其产量，科学家采用转基因技术培育出 抗环斑病毒的转基因番木瓜，抗环斑病毒转基因番木 1 材料与试剂 瓜品种主要有Event55．1、GM．YK和华农一号，华农 1．1试剂和仪器 一号是我国自主研发的转基因番木瓜，已批准进入区 DNA DP305植物基因组DNA提取试剂盒；Taq 域商业化，目前尽管已经建立了转基因番木瓜检测方 X U 聚合酶体系2 MasterMix(包括0．1Polymer- Taq 法，但对华农一号快速筛选方法的建立仍需开展。目 dNTP mmol／LTris-HCI ase／p．L、500limol／L each、20