缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞影响.docVIP

缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞影响[摘要] 目的：通过研究缬沙坦对兔视网膜色素上皮细胞生长的影响，以期寻找药物治疗、延缓PVR的发生、发展。方法：体外培养兔视网膜色素上皮细胞，取第三代细胞加入96孔板，分为①正常对照组；②血小板源性生长因子（PDGF）刺激组： 50μg/L PDGF；③缬沙坦（Valsartan）治疗组：0.2mg/mL Valsartan+50μg/L PDGF。分别行MTT法检测兔RPE细胞增殖能力，ELASA法检测兔RPE细胞培养液TGF-β1含量。结果：PDGF刺激组兔RPE细胞的增殖速度加快，而Valsartan治疗组对PDGF刺激后的兔RPE生长有明显抑制作用，且明显抑制PDGF刺激兔RPE细胞分泌TGF-β1。结论：Valsartan可抑制体外培养的兔RPE细胞生长 [关键词] 缬沙坦 视网膜色素上皮细胞 抑制生长 增殖性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy, PVR）是玻璃体视网膜手术后产生的一种视网膜玻璃体纤维组织增生性病变，是导致玻璃体视网膜手术失败的最常见原因，故抑制、延缓PVR的产生是提高玻璃体视网膜手术成功率的关键[1]。缬沙坦（valsartan）是一种血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，实验研究显示血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂能有效减轻组织纤维化程度，从而抑制肝脏、肾脏、心脏、胰腺等脏器的纤维化[2]。已有研究证实视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium, RPE）细胞在PVR中起主导作用[3]，本实验通过研究Valsartan对RPE细胞生长的影响，旨在证实Valsartan能否抑制RPE生长而在PVR中起类似的抗纤维化作用，以期寻找药物治疗、延缓PVR的发生、发展 1 材料和方法 1.1 材料 美国Forma CO2 培养箱、苏州超净工作台、日本OLYMPUS倒置相差显微镜、美国Metertech公司Σ550型酶联免疫检测仪、太仓HZ-8211K恒温振荡仪、北京精利LCZ-5-2型低温自动平衡离心机。DMEM／F12培养基、胎牛血清、小牛血清（均为Gibco公司）、TGF-β1测定ELASA试剂盒（南京建成生物工程研究所） 1.2 兔RPE细胞体外培养与鉴定 参照本科室建立的方法[4] 1.3 MTT法检测兔RPE细胞增殖能力 将第3代兔RPE细胞按1×103/孔个接种于96板，每孔培养体积为200μL。随机分三组：①正常对照组；②PDGF刺激组：50μg/L PDGF；③Valsartan 治疗组：0.2mg/mL Valsartan+50μg/L PDGF。从接种次日开始，每天将各组中的4孔细胞进行吸光度值测定，共测7天，每天换液一次。测定时每孔加入MTT（5mg/mL）20μL，继续培养4h，弃去培养液，加入二甲亚砜150μL，震荡10min，使结晶物充分溶解。酶联免疫检测仪在490nm处测定各孔吸光度值（OD值） 1.4 ELASA法检测兔RPE细胞培养液TGF-β1含量 将第3代兔RPE细胞接种于96板，每孔培养体积为200μL，置于37℃，5%CO2培养箱中孵育72h后，随机分三组：①正常对照组；②PDGF刺激组： 50μg/l PDGF；③Valsartan 治疗组：0.2mg/ml Valsartan+50μg/l PDGF，每组设4个复孔，继续培养72h后，取上清液用ELASA法测定TGF-β1含量，操作按试剂盒进行 1.5 统计学分析 所有数据以#63426;±s表示，采用SPSS13.0统计软件分析。兔RPE细胞增殖实验采用析因方差分析，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较用q检验，p