视网膜色素上皮细胞培养上清液联合视黄酸对骨髓间充质干细胞诱导分化作用.docVIP

视网膜色素上皮细胞培养上清液联合视黄酸对骨髓间充质干细胞诱导分化作用[摘要] 目的：探讨人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithe―lialium，hRPE)细胞培养上清液联合全反视黄酸（all-trans Retinoid Acid，RA）对骨髓间充质细胞(bone marrow stromal cells.BMSCs)诱导分化的影响。方法：实验分3组：RPE+RA+ BMSc共培养组,RPE+ BMSc共培养组,对照组。体外培养人视网膜色素上皮细胞(hRPE)和大鼠骨髓间充质干细胞(BMSc),取第2代HRPE和第3代BMSCc接种于Transwell双层培养板内共培养。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，采用免疫细胞化学染色检测胶质源性纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性标志物烯醇化酶(NSE)、光感受器特异性标志视紫质(Rhodopsin)在诱导细胞中的表达。结果：hRPE培养上清液+BMSCs+RA组诱导BMSCs更多的表达GFAP (84.57士6.68)％，NSE(56.29士6.51)％,和Rhodopsin (41.47士3.76)％；与RPE培养上清液+BMSCs组及单独BMSc组相比组间差异有统计学意义。结论：RPE培养上清液+BMSCs+RA可以诱导BMSCs向神经元、胶质细胞与视细胞分化 [关键词] 骨髓间充质干细胞 视网膜色素上皮细胞 全反视黄酸 共培养 诱导分化 BMSCs是来源于骨髓的非造血干细胞，具有多潜能分化特性。与存在伦理学争议的胚胎干细胞及增殖能力有限的视网膜祖细胞相比，BMSCs以其具有自体同源性、易分离和操作简单等显著优势，成为视网膜细胞移植治疗的理想供体。已有研究表明，视网膜细胞培养上清液能够体外诱导胚胎干细胞向神经细胞分化[1]。本研究旨在探讨BMSCs诱导分化的条件培养基 1 材料和方法 1.1 主要仪器 THERMO FORMA 3111 CO2培养箱（美国）；AIR-TECH BCM-1000A型生物洁净工作台（苏州）；OLYMPUS 1×70荧光倒置式相差显微镜（日本）；OLYMPUS PMCBXX年来，BMSCs 向神经细胞的分化研究受到了极大的关注。本试验所用到的RA是一种维生素A的代谢产物，它可以影响脊椎动物的发育和许多类型细胞的分化。RA常被用来进行诱导多潜能干细胞向神经细胞分化的研究，但机制尚不明确。RPE 细胞可分泌多种细胞因子这些细胞因子, 包括PEDF、FGF、 TGF2β、IL21 等。其中PEDF是一种多效的神经营养因子。对中枢及外周神经系统的许多部位的神经元具有神经营养、神经保护和神经分化作用；bFGF能诱导体内视网膜的重建，刺激所有源自中胚层的细胞以及许多源自神经外胚层和内胚层细胞的增生；bFGF可介导神经元的分化、对光感受器具有重要的保护作用；TGF2β可在正常RPE 细胞中表达。可调控细胞生长、分化、细胞外基质合成。本试验将三者共培养两周，结果显示：BMSCs可以高表达神经胶质细胞及神经元细胞特异性标志GFAP和NSE，同时我们还惊喜地发现诱导分化后的BMSCs表达光感受器细胞特异性标志Rhodopsin。这进一步证明了，BMSCs不仅可以向非间充质细胞转化，还可以跨胚层由起始的中胚层向外胚层发育，这为临床上进一步治疗视网膜和视神经疾病奠定了基础 参考文献： [1] Woodbury D, Schwarz EJ, Prockop DJ, et al. Adult rat and human bone marrow stromal cells differentiate into neurons[J]. Journal of Neuroscience Research, 2000, 61( 4 ): 364 370. [2] Xu GX．In Vitro Primary Culture ofHuman RPE[J]．Int J Opbtbalmol,2004：4(1)：l2. [3] 谢茂松,徐国兴等.大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养[J].国际眼科杂志,2007,7（5）:1285-1287.