远程缺血同处理对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用研究.pdfVIP

活性的影响，研究远程缺血同处理能否减轻兔脊髓再灌注损伤。 材料与方法 一、材料 1.主要仪器 1.1 多功能生理监护仪： MEC 509，美国； 1.2 有创动脉血压监测仪：Spacelab，美国； 1.3 血糖检测仪：One Touch，美国； 1.4 分析天平：TC350，上海； 1.5 分光光度计：DU850 型，Deckman 公司，美国； 1.6 显微镜：Leica。德国； 1.7 显微镜拍照装置：Leica，德国； 1.8 数码相机：Samsung D2000，韩国； 1.9 79—3 型石蜡切片机：南京医疗器械工业公司； 1.10恒温水浴槽：HH．W21．Cr700，南京医用设备厂。 2.主要试剂 2.1 水合氯醛：四川试剂厂，四川； 2.2 甲醛液：四川试剂厂，四川； 2.3 戊二醛：四川试剂厂，四川； 2.4 蒸馏水：贵阳医学院免疫学教研室，贵阳； 2.5 SOD、MDA 检测试剂盒：建成生物工程公司，南京； 2.6 利多卡因：四川试剂厂，四川； 2.7 医用酒精:西安试剂厂，西安； 2.8 二甲苯：西安试剂厂，西安； 2.9 肝素：西安试剂厂，西安； 2.10 庆大霉素：西安试剂厂，西安。 3.实验动物 3.1 雄性新西兰大白兔 3 只，体重 2.0-2.5KG，贵阳医学院动物实验中心提供； 3.2 雄性新西兰大白兔 25 只，体重 2.0-2.5KG，湖北医药学院动物实验中心提 供，其生长环境及饲养方法相同。 4.实验器材 4.1 自制操作台 4.2 手术器械：手术刀 2 把、止血钳 6 把、持针器 2 把、组织剪及线剪各 1 把、平镊 1 把、无菌巾单、纱布、咬骨钳、动脉瘤夹、缝线、5ml 及 10ml 注 射器若干、套管针、医用照明灯。 二、方法及步骤 1.兔血管及脊髓解剖练习 1.1 左肾动脉及腹主动脉解剖 采用贵阳医学院实验动物中心提供雄性新西兰大白兔，所有动物在实验前晚 禁食，不限制饮水。实验当天行耳缘静脉注射 10%水合氯醛（200-300mg/kg）麻 醉动物，以角膜反射及疼痛反应消失判断麻醉成功。兔仰卧位固定于实验台上， 于右侧后肢根部去毛消毒，剪开皮肤，暴露右侧股动脉（图 1），剃除腹部兔毛 备皮，碘伏消毒，铺无菌洞巾。采用 2%利多卡因注射行局部浸润麻醉，沿腹正 中线自剑突下两指剪开皮肤(切口 3—4cm)，腹膜逐层剪开腹膜，温盐水纱布包 被肠管，移动肠管向右侧，暴露左侧肾动脉及腹主动脉，穿线标记（图 2）。用 组织钳钝性分离腹主动脉肾动脉分支周围组织。 图 1 右侧股动脉的暴露 左肾 图2 左肾动脉及肾下腹主动脉暴露 1.2 脊髓解剖练习 动物准备及麻醉方法同前。兔俯卧位固定于实验台上，自背侧逐层剪开皮 肤、肌肉，鹰嘴咬骨钳及椎管咬骨钳配合去除椎板，暴露脊髓（图 3）。 图 3 脊髓及腰膨大的暴露 2.远程缺血同处理实验 2.1 实验动物分组 采用湖北医药学院实验动物中心提供的雄性新西兰大兔 24 只，体重 2.0-2.5kg,随机分为 4 组，每组 6 只，如图 4，若实验过程中动物死亡即增补。 假手术（Sham）组仅进行单纯手术操作但不阻闭腹主动脉；对照（Control）组 行单纯肾下腹主动脉阻闭 20min 后再灌注 36h；远程缺血同处理 A (PA)组行肾下 腹主动脉阻闭 20min，17.5min 时予左侧肾动脉缺血 30s/灌注 30s 相同处理 3 次 后同时开放肾下腹主动脉及左肾动脉；远程缺血同处理 B (PB)组行肾下腹主动脉 阻闭 20min，15min 时予左侧肾动脉缺血 60s/灌注 60s 相同处理 3 次后同时开放 肾下腹主动脉及左肾动脉。 图4 远程缺血同处理对兔脊髓缺血保护及作用时间研究 2.2 动物模型制作 所有动物实验前晚禁食，不限制饮水。实验当天行耳缘静脉穿刺，置入 22 号套管针，静脉注射 10%水合氯醛（20-30mg/kg）麻醉动物。麻醉成功后接输液