荧光光谱法研究萘酚绿B与牛血清白蛋白相互作用特征.pdfVIP

第27卷，第12期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．27，No．12，pp2542—2545 2 0 0 7年1 2月 Spectroscopy and Spectral Analysis December，2007 荧光光谱法研究萘酚绿B与牛血清白蛋白相互作用特征 颜承农 ，谢泽钰 ，梅 平 ，刘 义 1．长江大学化学与环境工程学院，湖北荆州 434023 2．武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉 430072 摘 要 在不同温度下，研究了萘酚绿B(NGB)作用于牛血清白蛋白的荧光猝灭光谱、同步荧光光谱、三维 荧光光谱和紫外一可见吸收光谱特征。分别用Stern-Volmer方程和Lineweaver-Burk双倒数方程等处理实验 数据，证实了在试验浓度和温度范围内，NGB与BSA可相互作用形成复合物，荧光猝灭作用符合静态猝灭 作用特征，作用力主要是疏水作用力和静电作用力；得到了相互作用的相关参数KLB，A ’，△ 和△ 等 的平均值分别为1．411×10 I ·mol ，一5．707 kJ·mol～，一3o．25 kJ·mol1和79．95 J·K ，结合位点 数为1．258，为研究NGB对蛋白质构象的影响和在生物体内的生物学效应等提供了重要信息。 关键词 萘酚绿B；牛血清白蛋白；荧光猝灭光谱；三维荧光光谱；紫外吸收光谱；热力学参数 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2007)12—2542—04 天平(日本岛津公司)，SYC-15超级恒温水浴(南京桑力电子 引 言 设备厂)。 NGB(中国医药公司北京采购供应站，分子式为C3。H 蛋白质是重要的生命物质，它与营养、发育、遗传、新 FeN3Na3O1583，摩尔质量878．48)储备液：200,ug·mL ； 陈代谢等生命活动密切相关。研究蛋白质等生物大分子与小 NGB工作液：2O g·mL ；BSA(上海生物化学制剂厂)溶 分子相互作用特征，探讨相互作用的热力学性质、结合力性 液：1．0×10 mol·L～；NaC1溶液；0．5 mol·L～；Tris- 质和相互作用的机理等，对于研究小分子的生物学效应，促 HC1缓冲溶液(pH 7．40)。所用试剂均为分析纯，水为二次 进蛋白质组学的研究和发展有着重要的意义_1]。萘酚绿B 去离子水，经检测均无荧光杂质。 (Naphthol green B，简称NGB)是一种稳定性比较好的有机 1．2 实验方法 染料。本研究是在实验条件下，扫描NGB作用于牛血清白 在1O mL比色管中依次加入2．0 mL NaC1溶液、2．0 蛋白(bovine serum albumin，简称BSA)的荧光猝灭光谱、同 mL Tris—HCL缓冲溶液、2．0 mL BSA溶液及一定量的NGB 步荧光光谱、三维荧光光谱和紫外一可见吸收光谱，分别用 工作液，用二次蒸馏水定容。选择 一282 nrn，激发光和发 Stern-Volmer方程和Lineweaver-Burk方程等处理实验数据， 射光狭缝宽度分别为15和2．5 nrn，在250~480 nnl范围内 证实了NGB与BSA可相互作用形