3色谱-毛细管电泳法探究.pptVIP

人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * 例1 兔血浆中氟比洛芬的测定 电泳条件： 75?m?100cm毛细管柱 分离电压30kV, 温度30C° 虹吸进样30s UV检测波长254nm 分离缓冲液为20mmol/L硼砂含25mmol/LSDS, pH9.02 讨论:硼砂缓冲液中加入SDS可包裹血浆中蛋白质，减少蛋白质对分离测定的干扰和对柱的污染 空白血浆 血样 内标 * 例2 高效毛细管电泳法测定注射用水溶性维生素的含量 采用胶束电动毛细管色谱法，分离分析注射用水溶性维生素制剂中VB1、VB12、VB6、VC、烟酰氨、叶酸、D-生物素、核黄素磷酸钠、泛酸钠9种成分 电泳条件： 未涂层熔融石英毛细管(67cm×50??m，有效长度55cm) 运行缓冲液为50 mmol/LSDS-50 mmol/L的硼酸钠（pH 8.33） 检测波长214 nm 压力进样（6.89KPa×10 s） 运行电压15.0 kV；毛细管柱温25℃ * 分析前毛细管处理 每天分析之前，分别依次用1 mol/L氢氧化钠溶液、高纯水、运行缓冲液冲洗5, 10, 10 min 每次分析之间分别用0.1 mol/L氢氧化钠溶液、高纯水、运行缓冲液冲洗毛细管3, 5, 5 min * 测定方法 取约1.5g的内容物，精密称定，置于10ml量瓶中，用水冲洗瓶内壁，洗液与样品合并，加水溶解并稀释至刻度，混匀。用0.22?m微孔滤膜过滤后，在上述电泳条件下进样，记录维生素B12和D-生物素的峰面积 另精密量取上述样品溶液1.0ml,置于100 ml量瓶中，加水稀释至刻度、摇匀，同法测定，记录VB1,VB6,VC、烟酰氨、叶酸、核黄素磷酸钠、泛酸钠的峰面积，按外标法计算样品含量 * 测定结果 测得各种成分按标示量计算的百分含量（%）在97.5±0.9到103.8±0.7之间（n=3） 制剂中9种成分的毛细管电泳图如下： 1-烟酰氨； 2-VB6；3-D-生物素；4-核黄素磷酸钠；5-VB12；6-VC；7-泛酸钠；8-叶酸；9-VB1 混合对照液 制剂 * 毛细管电色谱（CEC） 将HPLC中的固定相填充到毛细管中作为固定相，以电渗流为流动相的驱动力，利用样品与固定相的相互作用的差异而达到分离 HV 分离柱 检测器 分流控制阀 反压阀 高压电源 电极 * 例 氟西汀和西替利嗪对映体的双动态吸附毛细管电色谱手性分离 以SO3-?-CD为手性选择剂，海美溴铵(HDB)为阳离子表面活性剂，在Tris-H3PO4 (pH3.0)的体系中分离了氟西汀和西替利嗪对映体 色谱条件 毛细管柱35cm?50?m, 有效长度30cm 压力进样：13.8 kPa?4s；分离电压15kV 紫外检测210nm；分离柱温25?C * 讨论 采用HDB作添加剂使形成双动态涂层，反转电渗流，采用正极检测，大大缩短分析时间 在20mmol/L Tris-H3PO4 (pH3.0)条件下，HDB含量0.1g/L，SO3-?-CD 20mmol/L，氟西汀和西替利嗪对映体在较短的时间内达到良好分离 pH2时石英毛细管壁的硅羟基不解离，即使加入HBD也无法形成双动态吸附。当pH增加到3时，硅羟基发生解离后而带负电，带正电的HBD通过静电作用在柱内形成第一动态涂层，而后再静电吸附一层负电性的SO3-?-CD，双动态吸附的形成导致分析物R值的增大 * 例 梯度加压毛细管电色谱同时分离大黄提取液中5种蒽醌类化合物 毛细管电色谱主要是以电驱动流动相为主要的分离模式，而压力流驱动毛细管电色谱是以液相色谱泵为流动相的主要驱动力，它克服了仅靠电渗流驱动的一些限制因素，可方便地对流动相的组成、性质和流速进行调节，尤其是能够实现流动相梯度洗脱，是毛细管电色谱法发展的重要方向 * 色谱条件 C18熔硅毛细管柱（27cm?75 ?m），有效长度20cm 流动相A组成：醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=4.5) ；流动相B组成：乙腈 流动相流速0.08mL/min 进样阀定量进样20nL 在260nmUV柱上检测 -3kV 电压下，大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素和大黄酸5种成分得到最好分离效果 * A?E为5种梯度 （不加电压） 在上述C梯度条件下，改变电压 最佳 分离结果 * 多种色谱技术提供了不同的选择性 * 四、毛细管电泳仪装置示意图 * 进样 进样体积一般是不知道的，进样量通常用压力与时间或