凋亡抑制因子Livin在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第45期 凋亡抑制因子 Livin在 白血病和淋 巴瘤 细胞株 中的表达 顾永耀 ，贺菽嘉 ，冯振博，王 华 (广西医科大学，广西南宁530021) [摘要] 分别采用RT-PCR与Westernblot的方法，在 Raji、Jurkat等7种 白血病和淋巴瘤细胞株中检测 Livin Ot、13两种剪接体mRNA与蛋白的表达水平。发现7株细胞中Raji、MOLT-4、、HL_60和K562细胞在 mRNA和蛋白 水平均高表达Livin，Jurkat细胞可能因为LivinmRNA表达较弱 ，蛋 白水平检测不到，Huff8和 KG一1两细胞株中未 检测到 Livin的表达。认为Livin在大多数白血病和淋巴瘤细胞株中表达，说明Livin可能与血液系统恶性肿瘤的 发生机制有一定关联。 [关键词] 白血病；淋巴瘤 ；Livin；基因表达 [中图分类号] R730．4 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)45-0041-02 凋亡抑制蛋 白Livin在大多数正常成人组织不 1．2．2 总RNA的提取 1mlTRIzol试剂裂解 5× 表达或低表达，而选择性的在多种恶性肿瘤组织中 lO。一10x10。个悬浮细胞，然后加入0．2ml氯仿， 高表达，使其成为诱导凋亡肿瘤治疗策略的潜在靶 用力震荡，12000r／min离心 15min，取上清，加入 点。2007年 8月 一2008年 3月，我们检测 了7种 白 0．5ml异丙醇室温沉淀 RNA，75％乙醇洗涤，干燥 血病和淋巴瘤细胞株中LivinmRNA和蛋 白水平的 后用 DEPC处理水溶解 RNA。电泳检测 RNA的完 表达情况，以了解 Livin在 白血病和淋巴瘤发生中所 整性，紫外分光光度计测定 RNA 的含量和纯度 ， 起的作用，并且进一步研究其功能。 一 80℃保存备用 。 1 材料与方法 1．2．3 RT—PCR检测 按逆转录试剂盒说明书步 1．1 材料 TRIzol试剂为 Invitrogen公司产品，逆 骤进行操作。反应体系20 l，其中总RNA2．5Ixg， 转录试剂盒为Fermentas公司产品，Taq酶、dNTP为 oligo(dT)18primer1txl，70oC孵育 5rain，加 5×逆 TaKaRa公司产品，RPMI1640为 Hyclon公司产品， 转录反应缓冲液4Ixl，RNA酶抑制剂20U，dNTP2 新生胎牛血清为杭州四季青公司产品，硝酸纤维素 l，于37℃孵育 5min，然后加 M—MLV逆转录酶 膜为Gelman公司产品，兔抗人Livin多克隆抗体为 200U，42oC孵育90min，再于70℃ 10min终止反 Biochemieals公司产品，碱性磷酸酶标记的二抗为北 应，合成的cDNA 一20℃贮存。根据 LivinmRNA 京中山公司产品。 编码区序列由上海生工生物工程公司合成引物。上 1．2 方法 游引物 ：5一GTCCCTGCCTCTGGGTAC-3，下游引物 ： 1．2．1 细胞培养 Jurkat(人T细胞 白血病细胞 5一CAGGGAGCCCACTCTGCA-3，扩增片段长度 ：仅 株)和 Raji(人 Burkitt’s淋 巴瘤细胞株)为本室 自 亚型为368bp，B亚型为314bp。PCR反应条件 ：94 存；MOLT-4(人淋巴母细胞性白血病细胞株)、Hut78 ℃变性 3min，94℃ 1min，60oC1min，72oC1min， (人T细胞淋巴瘤细胞株)、HL-60(人急性粒细胞性 30个循环，最后72℃充分延伸8min。以8一actin作 白血病细胞株)、KG．1(人急性髓性 白血病细胞株)、 为内参照，其上游引物：