糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎中对调节性T.docVIP

　　糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎中对调节性T 【关键词】 糖皮质激素;,脑脊髓炎,自身免疫性,实验性;,T细胞;,FOXP3;,IL 　　Effect of glucocorticoid on CD4+CD25+ regulatory T cells in mice ental autoimmune encephalomyelitis 　　【Abstract】 AIM: To investigate the modification by glucocorticoid on CD4+CD25+ regulatory T cells in mice ental autoimmune encephalomyelitis (EAE). METHODS: Glucocorticoid or placebo (control group) ice that had been immunized yelin basic protein (MBP) extracted from the fresh spinal cord of OX. CD4+CD25+ regulatory T cell specific FOXP3 and blood IL10 etry and ELISA, respectively. RESULTS: pared ptoms those in the control group. CONCLUSION: Glucocorticoid can relieve the symptoms of EAE by increasing regulatory T cells and their activities, yelitis, experimental autoimmune; T cells; FOXP3; IL10 　　【摘要】 目的：研究糖皮质激素在实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）治疗中对调节性T细胞的调变作用. 方法：采用从新鲜牛脊髓中提取的髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫诱导Balb／c小鼠成功诱发EAE后，分组注射糖皮质激素或者安慰剂，在采用指标评估基础上，分别采用流式细胞术和ELISA方法检测CD4+CD25+调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL10的表达水平. 结果：与对照组相比，糖皮质激素注射组小鼠发病程度轻，调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL10的表达水平均有明显差异. 结论：糖皮质激素可能通过增加调节性T细胞的数量及活性，减轻EAE的症状，为临床治疗多发性硬化(MS)提供理论基础. 　　【关键词】 糖皮质激素; 脑脊髓炎,自身免疫性,实验性; T细胞; FOXP3; IL10 　　0引言 　　多发性硬化(multiple sclerosis, MS)是由T细胞介导的、以中枢神经系统(S)白质脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病［1］. 糖皮质激素可通过多种途径调节免疫功能，是目前治疗MS 急性复发期的首选药物［2］. 在动物模型中，实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)是一种由Th细胞介导的局限于中枢神经系统的迟发性超敏反应型自身免疫性疾病，被认为是人类MS公认的理想动物模型［3］. 本实验我们用从牛脊髓中提取出的髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)，同时注射百日咳杆菌菌液，诱发Balb／c小鼠产生EAE后，辅以糖皮质激素治疗，检测CD4+CD25+调节性T细胞特异性FOXP3和血中IL10的表达水平. 　　1材料和方法 　　1．1材料Balb／c雌性小鼠30只，6～8 a公司，氢化可的松(hydroeortisone，HC)浓度为5 g/L，由天津金耀氨基酸有限公司提供. 检测鼠调节性T细胞的Mouse Treg Flop;D System公司. 　　1.2方法 　　1.2.1MBP的提取及定量MBP的提取参照文献［4］：将获得的新鲜牛脊髓去除杂质洗净后, 将200 mL预冷的氯仿甲醇(2∶1)混和液与100 g牛脊髓用高速组织匀浆机制成组织匀浆. 将匀浆倒入烧杯中. 加入800 mL预冷的氯仿甲醇(2∶1)混和液，置于4℃冰箱磁力搅拌过夜. 将磁力搅拌后的匀浆进行真空抽滤后得到的滤渣重新加入1000 mL氯仿甲醇混和液，磁力搅拌过夜. 同法操作6次. 取滤渣用300 mL消毒纯水溶解，调pH至3.0. 置于4℃冰箱中，磁力搅拌4 h， 12 000 r／min离心1 h. 将上清液装入透析袋，放入消毒纯水透析过夜. 将透析袋用PEG20000浓缩3.5 h，分装，置于-70℃备用. 取少量浓缩液适量稀释后，紫外分光光度计上测定A260和A280，计算出浓缩液中的蛋白质浓度. 蛋白质