紫杉醇对HEC1B细胞凋亡诱导作用的实验研究.docVIP

　　紫杉醇对HEC1B细胞凋亡诱导作用的实验研究 【摘要】 目的： 探讨紫杉醇对体外培养的人子宫内膜腺癌细胞（HEC1B）细胞凋亡的诱导作用. 方法： 体外培养HEC1B细胞，用浓度2, 4, 8, 16, 20 nmol/L的紫杉醇作用细胞12 h，24 h，48 h后，提取细胞DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳；消化HEC1B细胞并经碘化丙锭(PI)染色后，流式细胞仪(FCM)对细胞进行细胞周期分析；电子显微镜对紫杉醇作用后的HEC1B细胞进行形态学分析. 结果： 体外培养的HEC1B细胞经不同浓度的紫杉醇处理后，细胞生长明显受到抑制；于8 nmol/L紫杉醇作用48 h后可观察到细胞凋亡特异的DNA梯状电泳；流式细胞仪分析证实，细胞凋亡率达19.7%；且电镜下可观察到典型的凋亡早期形态学改变. 结论： 人子宫内膜腺癌细胞（HEC1B）细胞对紫杉醇具有药物敏感性，紫杉醇对HEC1B细胞的杀伤作用，是通过诱导细胞凋亡途径实现的. 【关键词】 紫杉酚；子宫内膜肿瘤；腺癌； HEC1B； 细胞凋亡 　　【Abstract】 AIM: To investigate the inhibition of proliferation and the induction of apoptosis in in vitro cultured human endometrial adenocarcinoma cell HEC1B by taxol. METHODS: Human endometrial adenocarcinoma HEC1B cells ol/L taxol for 12, 24, 48 h respectively. Isolated DNA fragments from HEC1B cells eter (FCM)assay. Electron microscopy orphological changes of HEC1B cells after treated ol/L taxol for 48 h, DNA ladder tormation icroscope. FCM assay revealed that the apoptotic rate an endometrial adenocarcinoma cell HEC1B. 　　【Keyetrial neoplasms; adenocarcinoma; HEC1B; apoptosis 　　　0引言 　　子宫内膜癌(endometrial cancer, EC)是女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，占女性生殖系统恶性肿瘤的20%~30% . 在治疗方面一直沿用传统的手术或手术加放疗. 因此，疗效及治愈率无提高. 化疗在恶性肿瘤的治疗中具有重要作用，在晚期肿瘤的治疗中尤为重要. 近年来，子宫内膜癌的发病率有所上升，为了进一步提高子宫内膜癌的疗效，探索新的合适的化疗药物很有必要. 　　紫杉醇(Taxol, Paclitaxe1)是20世纪70年代首先从美国西部紫杉中分离得到的，它在癌细胞分裂时能与细胞微管蛋白结合，促使细胞中微管稳定和聚合，使细胞有丝分裂受到阻断，从而抑制肿瘤生长［1］. 早期在卵巢癌细胞的体外实验中发现，紫杉醇的细胞毒性与其诱发细胞凋亡有关［2］. 紫杉醇作为新一代化疗药物，其开发和应用已大大提高了卵巢癌的临床疗效. 为进一步明确其对子宫内膜癌的治疗作用，本实验在体外研究紫杉醇对HEC1B细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用奠定基础. 　　1材料和方法 　　1.1材料HEC1B子宫内膜腺癌细胞株购自中科院上海生命科学研究院细胞所，紫杉醇购自北京四环医药科技股份有限公司. 噻唑蓝(MTF)，EMEM 培养基为美国Gibco公司产品. 　　1.2细胞培养人子宫内膜腺癌细胞株HEC1B培养于EMEM培养液中(含100 mL/L胎牛血清, 1.0 mmol/L丙酮酸钠，1.0 mmol/L非必需氨基酸和1.5 g/L碳酸氢钠，pH 7.0～7.2)，于37℃, 50 mL/L CO2培养箱中培养，每48 h换液一次. 细胞呈单层贴壁生长，2.5 g/L胰蛋白酶消化传代. 选用对数生长期细胞进行实验［4-5］. 　　1.3细胞增殖活力检测将贴壁细胞消化传代后计数，调整细胞浓度为1×104/mL，接种于24孔培养板中，37℃, 50 mL/L CO2及饱和湿度条件下培养. 实验时分为2, 4, 8, 16, 20 nmol/L 5个药物浓度组及对照组，每组5个孔，细胞接种后24 h加药，分别于加药后12, 24, 48, 72 h测定各孔的吸光度值（A值）. 测定前弃去培养孔上清后，每