胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA倍体分析的临床诊断.docVIP

　　胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA倍体分析的临床诊断 【关键词】 胸腔积液,恶性；,DNA；,倍体；,胸部肿瘤；,流式细胞术 　　摘要: 目的 探讨胸腹水脱落细胞流式细胞法DNA倍体分析对诊断良恶性胸腹水的临床价值。 方法 应用流式细胞仪（FCM）对84例患者（恶性肿瘤组35例，非恶性肿瘤组49例）的胸腹水脱落细胞进行DNA倍体分析；以检出异倍体为恶性肿瘤判断标准，并与胸腹水常规脱落细胞学涂片检查结果比较。 结果 （1）恶性肿瘤组25例检出异倍体，阳性检出率为71.4%；常规细胞学法20例检出癌细胞，阳性检出率为57.1%；FCM法与细胞学检查法联合检测28例阳性，检出率为80%。（2）在恶性肿瘤组的25例异倍体中，17例病理检查检出癌细胞，8例未检出；而在20例常规细胞学检出癌细胞的患者中，3例DNA倍体分析无异常。（3）非恶性肿瘤组8例DNA表现为异倍体峰，但病理检查示间皮细胞活跃增殖，或未检出癌细胞。 结论 FCM法的灵敏度较脱落细胞法高，但2种方法的检测结果存在一定的差异；FCMDNA倍体分析在良恶性胸腹水的鉴别诊断上尤其当临床高度可疑而病理无法定性时，可作为诊断的重要参考与补充。 　　关键词: 胸腔积液，恶性； DNA； 倍体； 胸部肿瘤； 流式细胞术 　　胸腹水是胸腹腔脏器病变常见的临床表现，其产生机制十分复杂，准确快速地判定其良恶性对疾病的诊断、治疗有重要意义；有的疾病有时仅以胸、腹水为首发唯一症状，给临床鉴别诊断带来许多困难。传统的判断方法主要依靠胸腹水的常规脱落细胞学检查和生化指标检测，这些方法易受主客观因素影响，检出率较低。流式细胞术（FCM）具有对流动状态下的细胞进行快速大量、多参数分析的特点，在肿瘤研究方面的应用越来越广。笔者应用FCM对84例患者的胸腹水脱落细胞进行DNA倍体分析，并与胸腹水常规脱落细胞学涂片检查结果比较，探讨DNA倍体分析对良恶性胸腹水的鉴别诊断价值。 　　1 临床资料 　　1.1 一般资料 84例中，男性50例，女性34例，年龄（53,2±15.7）岁（21～99岁），均经临床诊断和病理细胞学检查确诊，并经X线检查、CT、MRI证实。84例患者分为2组：（1）恶性肿瘤组（n=35）：肺癌19例，胃癌5例，肝癌4例，胰腺癌2例，卵巢癌2例，胆囊癌、附睾腺癌、胸腺癌各1例。（2）非恶性肿瘤组（n=49）：结核性胸膜炎17例，肝硬化15例，肺梗死6例，脓胸4例，慢性胃炎3例，心功能衰竭2例，外伤2例。 　　1.2 方法 （1）将新鲜胸水或腹水1000 r/min离心10 min，收集脱落细胞，用pH 7.4、浓度0.01 mol/L的PBS洗涤2次，将悬液的细胞数调整为106 mL1，备用。取上述悬液100 μL在DNAPre样品自动制备仪（美国BeckmanCounter公司）上完成破膜、PI染色和固定等步骤，放置30 min后，用300目的滤网过滤除去细胞团块和凝固块，备用。（2）DNA倍体分析：FCM（EPICS XL 型，美国BeckmanCounter公司）检测染色处理后的悬液，每例测定10 000个细胞，数据分析采用MCYCLE细胞周期分析软件，并以健康人外周血淋巴细胞作为正常二倍体标准对照。（3）常规脱落细胞学涂片检查：结果判断以病理科细胞学检查报告为准。（4）DNA异倍体的判断。根据文献[13]制定FCM诊断瘤细胞的标准如下：①在正常二倍体G0/G1峰以外出现另一G0/G1峰作为标准，并且其DNA指数（DI=样品细胞G0/G1峰道值/标准细胞G0/G1峰道值）gt;1.10或lt;0.90，且有相应的G2M峰出现。②若直方图中仅出现单一G0/G1峰，则要求细胞周期中G2M期的细胞数gt;2.5%细胞总数；G0/G1峰的CV比值超过正常的CV比值的平均值两倍的标准差。③G0/G1峰明显不对称。④若直方图中二倍体细胞干系的增殖细胞数gt;10%细胞总数，即S期gt;10%，则定义为异倍体出现。 　　2 结果 　　2.1 DNA倍体分析 FCM分析健康人外周血淋巴细胞获得的正常细胞周期，其DNA含量直方图分为G0/G1期、S期、G2M期3个细胞峰，G0/G1、G2M细胞峰DNA的含量呈正态分布，S期细胞峰是一个加宽的正态分布（图1）。依据DNA异倍体的判断标准认为图B～E有异倍体出现，图F带有一个并非为异倍体的“肩”峰。 　　A：正常细胞周期；B：正常二倍体峰外出现第二峰，C：S期gt;10％，D：G0/G1峰明显不对称，E：G2Mgt;2.5％；F：G0/G1峰带有一个“肩”. 　　图1 胸腹水脱落细胞的FCMDNA分析（略） 　　Fig 1 FCMDNA ploid analysis for the exfoliated cell 　　2.2 恶性肿瘤组25例