犬细小病毒vp2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与 - 中国农学通报.pdf

中国农学通报 2011,27(7):352-355 Chinese Agricultural Science Bulletin 犬细小病毒VP2基因的克隆及其 在大肠杆菌中的表达与检测 1 1 1 1,2 毕聪明 ，费东亮 ，陈 强 ，赵 刚 1 2 （辽宁医学院畜牧兽医学院，辽宁锦州121001；辽宁省重点疫病应急中心，沈阳110000） 摘 要：为表达犬细小病毒VP2 蛋白(CPV VP2) ，用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2 蛋白功能研 究，根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2 基因的1对特异引物，以细小病毒感染的犬粪样 品中提取的总DNA 为模板，进行PCR 扩增，把扩增产物克隆至pMD 18-T 载体进行测序、鉴定。将克隆 的VP2 基因片段克隆至原核表达载体PGEX-6P- 1，再将构建成功的原核表达质粒载体PGEX-6P-VP2 转 化至大肠杆菌BL21 中，进行鉴定、测序、表达。结果表明，克隆的VP2 基因片段全长1755 bp ，与6 个VP2 基因序列的同源性为98.7%~99.7% 。Western-blotting 分析显示，表达产物约为90 kD 的融合蛋白，可被 犬细小病毒阳性血清所识别，具有良好的反应原性。 关键词：犬细小病毒；VP2 基因；克隆；表达 中图分类号：Q813.1+ 1 文献标志码：A 论文编号：2010-2878 Clone,ExpressionandDetectionofCDVVP2GeneinE.coli 1 1 1 1,2 Bi Congming , Fei Dongliang , Chen Qiang , Zhao Gang 1 ( AnimalHusbandryandVeterinarycollege,LiaoningMedicalUniversity, Jinzhou Liaoning 121001; 2 TheintensiveepidemicsemergencycenterofLiaoningShenyang Liaoning 110000) Abstract: To establish a yeast Pichia pastoris expression system expressing canine parvovirus VP2 protein (CPV VP2) to serve the diagnosis of CPV, development of CPV vaccine and research of VP2 protein function. To test the structure and function of VP2 protein in diagnoses and immunization in CDV.A pair of primers was designed and synthesized based on Canine Parvovims (CPV) from GenBank, and the VP2 gene of CPV was cloned from bloody stool of a dead dog by PCR. The results showed that the complete sequence of the