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瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达-《中国药科大学
学报
276 Journal of China Pharmaceutical University 2004, 35(3):276 ～279
1 1 1-4 1 3 3 3
庞实锋 , 吴晓萍, 李校 , 郑 青 , 于平野, 曲红艳 , 王艳萍
1 2
(, 510632;;
3 4
;, 510630)
【 】 :为了便于追踪瘦素(Leptin)在体内的去向, 对其进行体内定位, 设计合成 Leptin 荧光分子
蛋白探 。 :用PCR 技术将Leptin cDNA 与绿色荧光蛋白cDNA 构建成融合基因LG, 然后将其克隆进原核表
达载体pET3c 中, 构建成原核表达工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG。用Western-blot 杂交检测重组蛋白的免疫原性,
用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性。 :DNA 测序结果证实设计合成的融合基因与预期 一
致;构建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG 获得了表达, 融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上;Western-blot
杂交检测表明重组蛋白具有Leptin 的免疫原性;经IPTG 诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其
能发射出强烈的绿色荧光。 :融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达, 表达的融合蛋白具 Leptin 的免疫原
性和G P 的发光特性。 为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径。
【】 瘦素;绿色荧光蛋白(G P);融合基因;高效表达
【】 Q78 【】 A 【】 1000-5048(2004)03-0276-04
(Leptin)(Obese gene, , ,
OB), 167 , N luc、lacZ、cat、gus
21 , OB Leptin [ 11, 12] 。Leptin G P
146, , pET3c ,
106 ～ 140 , 16 kD[1-2] 。 BL21(DE3)。
, Leptin , Leptin
Leptin 。
[3-9]
。, Leptin 、
、, 1
。,
1.1 菌株和质粒
,
BL21(DE3)、pET3c(
。(green fluore-
), PCAMBIA 1302 (
sent protein,G P), G P 238
, ),
,
, 65 ～ pGEX-Leptin ()。
1.2 试 剂
67 (--)
Pfu、TaqDNA 、T DNA 、
, 4
[ 10]
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