胃蛋白酶活力检验方法的改进论文.pdfVIP

of of Branch,Chineseof Biological Proce—e———dingsth—e—10thSymposium Associati—o—nAnim——al——andV—eterinaryScien—c—e 已完全掌握。 2．3 目前还存在一些无法克服的技术难题 如测定结果的不稳定性；同一批样品采用同样的方法进行测 定，其结果还有一定的误差；偶尔也会出现所测得的数据与厂家报告单不符，与2000版《中国兽药典》规定的 范围也不吻合。当然这些操作都是严格按照药典提供的方法进行操作还是无法避免这些差异。为此我们也 将继续不懈努力，希望在日后的工作中争取早日找到突破口，一举攻破此项难题。 胃蛋白酶活力检验方法的改进+ 舒静，段艳萍 (中牧股份兰州生物药厂， 甘肃兰州730046) 胃蛋白酶系自健康的猪、羊或牛的胃黏膜中提取的，为白色或淡黄色的粉末，无霉败臭，有引湿性，易溶 于水，在50℃～52℃活力最大。在我厂主要用于培养基(肉肝胃酶消化汤)的制作。 多年来对原材料胃蛋白酶活力的检验一直沿用不精确的方法进行操作。 1 旧方法操作步骤 1．1 样品的调制 瓶中。振摇15rain后放置备用。 1．2蛋白处理取两周以内的新鲜鸡蛋在水中煮沸lOmin，立即用冷水冷却，剥去卵壳与薄膜，去除蛋黄用 水洗净，用干燥的筛磨摸筛过并放在清洁的烧杯中，立即称取109放入小乳钵内加已经准备好的lOOml酸性 水研匀倒入三角瓶中，并将乳钵洗涤干净。 1．3样品的测定 的水浴锅中消化4小时，停止消化后吸取上清液，把沉淀放置于lOml的量筒中，30min沉淀在2ml以下即为 胃酶的消化倍数。 2旧的检验方法存在的问题 2．1 由于胃蛋白酶的保存方法和场地不同，取样时就可出现外围的胃酶颜色深、湿性大；内层的颜色浅，较 为干燥，做出平行样后的结果经常没有可比性。 2．2对于鸡蛋的选购是否新鲜无法作出准确的判定，即而对实验结果有决定性的影响。 2．3 由于这种实验方法耗时长在消化过程中难免会有水温的忽高忽低，或受热不均匀等无法避免的因素， 也使实验结果受到严重影响。 样品测定的最终判定结果需要目测沉淀是否在2ml，可由于以上种种原因最终结果常常是有一个都没有或 一个以上“2ml”出现。从而导致此次实验失败。既浪费了大量的物力、人力又耽误了生产。所以在查阅了大 量的资料，作好充分的实验仪器和各种试剂的准备，经过反复多次的对比实验后，我们根据2000版《中国兽 药典》启用了新方法。 3新方法操作步骤如 3．1 对照品溶液的制备 精密称取经105 oC干燥1．5小时的卜酪氨酸0．59，加盐酸溶液至1000ml。 3．2供试品溶液的制备取本品适量(0．3／胃酶活力单位)，精密称定，加入上述盐酸溶液至1000ml。 *作者简介：舒静(1975～)，助理工程师，生物制品的检验和原材料化验 ·--——206--—— 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 3．3 测定法取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液lml，另3支各精密加入供试品溶液lml，置37℃ -I-0．5℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5％三氯醋酸5ml，摇匀，滤过，取续滤液备用，另取试管2支，各 oC 精密加入血红蛋白试液5ml，置374-0．5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸5ml，其中1支加 供试品溶液lml，另1支加上述盐酸溶液lml，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照， 按分光光度法，在275nm波长处测定吸收度，算出平均值As和A。按下式计算： X 每1含蛋白酶活力单位数=(AGX n)／(A。×G×10×181．19) 式中A——供试品的平均吸收度； As——对照品的平均吸收度； Gs——对照品溶液每lml中含酪氨酸的量，btg； G——供试品的取样量，g； n——供试品的稀释倍数。 在上述条件下，每分钟能催化水