MMP-9和Snail在骨肉瘤中的表达及其诊断意义.pdfVIP

ChinJLabDiagn，May，2012，Vol16，No．5 文章编号 ：1007—4287(2012)05—0916—02 MMP一9和 Snail在骨肉瘤中的表达及其诊断意义 蒋朋翔，刘光耀 ，梁柏坚，钟 磊 (吉林大学 中日联谊医院 骨科 ，吉林 长春 130033) 骨肉瘤约 占原发恶性骨肿瘤的 2O ，好发于 1O 60℃，30s；进行 45个循环 。每次延伸阶段读取吸光 ～ 2O岁年龄段 。具有恶性度高、早期转移 、病情进 值。PCR结束后 ，95℃变性 1min，然后冷却至 展迅速，五年生存率低的特点。由于传统检查方法 55℃，保持 4s，每次读取吸光值 。各组均三复孔检 确诊时常常已发生远处转移 ，因此早期诊断骨 肉瘤 测取 CT值 。得出 目的基因相对于内参照基因的相 是提高疗效的关键。目前诊断骨 肉瘤尚缺乏具有针 对表达量后再进行统计学分析。 对性的特异标记物 ，常采用多种生物指标联合检测 1．4 Western—blot方法检测 以裂解液裂解骨 肉 的方法。现研究发现恶性肿瘤中高表达 Snail，提示 瘤细胞 ，离心后收集上清液，以Lowry比色法测定 Snail是肿瘤发生 、发展和浸润转移 的一个重要调节 蛋白浓度。取蛋 白经 SDS—PAGE凝胶电泳 、转膜 ， 因子_】。J，MMP一9是基质金属蛋 白酶家族中的重要 用含 5％脱脂牛奶室温封 闭，加入一抗稀释液 室温 一 员 ，是一种蛋 白水解酶。 目前未见 Snail及 MMP 孵育 2h，采用 ECL蛋 白印迹显色试剂显色，拍照， 一 9对骨肉瘤诊断意义 中的相关文献报道。为此，我 扫描图片 。以J3一actin作内参照。 们采用 Realtime—PCR及Westen—blot方法对 3O例 1．5 统计学分析采用 SPSS13．0统计软件包进行 手术切除后的骨 肉瘤标本 ，15例骨软骨瘤标本及 l5 统计学处理 ，，取a一 0．05水平 ，P 0．05则被认 例正常骨组织的标本定量检测 Snail及 MMP一9的 为有统计学意义。 水平，探讨其在骨肉瘤诊断中的作用 。 2 结果 1 材料及方法 2．1 Realtime-PCR方法检 测 MMP一9、Snail表 1．1 一般资料 取吉林大学中 日联谊医院手术切 达结果显示MMP一9、Snail在 3O例骨 肉瘤组织及 15 除后的深低温冷冻骨肉瘤标本 30例 ，骨肉瘤标本均 例骨软骨瘤组织 中MMP一9、Snail的均有表达。从 经病理诊断证实，所有患者术前未行放 、化疗治疗 。 整体上看 MMP一9、Snail在骨 肉瘤组织中的表达 明 其中男性 21例 ，女性 9例 ，年龄 8—24岁 ，平均 (12． 显高于骨软骨瘤组织见 (图 1、2)。骨肉瘤 中MMP一 04±8．44)岁。选取 同期存档骨软骨瘤标本 15 9、Snail相对表达量 明显高于骨软骨瘤及正常骨组 例 ，手术废弃正常骨组织 15例作为对照组 。 织有统计学意义 (P0．05)。 1．2 主要试剂 Realtime—PCR试剂盒来 自In— vitrogen公司，定量 PCR试剂来 自TAKALA 公 司，RNA抽提试剂来 自Invitrogen公司。 1．3 Realtime-PCR方法检测 根据 Invitrogen公 司的Trizol操作说明书，抽取总 RNA。用逆转录试 剂盒将 RNA逆转录为 cDNA。MMP一9引物序列 为：上游 引物 5 TTGACA GCGACAA GAA GT— GG一3；下游引物 5-CCCTCAGAGAATCGCCA GTA一3。Snail引物序 列为 R：5 TTCTTCGC— 图 1 骨 肉瘤 、骨软骨瘤及正