蓝藻色氨酸调节型突变体的筛选和分析.pdf

维普资讯 农业现代化研冗 1990，11(1) 4—50 Research ot AgricuhuralModernization 蓝藻色氨酸调节型突变体的筛选和分析 李用生 芏韭勤 蔡尚蠢 (中国科 学院水生生物研究所 ) 摄 耍 自发或经MNNG谱变获得了22株稳定的直腥藻i0lT抗6一氟色氧酸(BFT)突变体．有些突变体 分泌过量的色氟酸，盐 自供应培色氟酸营养映陷型大骑杆苗，使其周围形成明显的生长圈．它们中的一些还能 缓解6FT对野生堂生长的抑翩作甩．突变体BF卜 l薹咀胞内色氯酸台量与野生 塑相近，怛分泌到培养基的色氟 酸量为野生型的2～3倍 ·外挪BFT能促进穿变体舶细胞分茴色氟酸和蛋白质．外薄芳香类氟基酸对鱼腥藻 1O11妁生长有抑制作用．以上结果暗示鱼强藻i0iT色氟酸生物台废可能存在某些在蓝藻中尚未报道的机理， 其中包括存在受色氟酸 (hp)专性抑制的3一脱氧一2一阿拉伯魔酮糖一1一磷酸合废酸 (DAHp)同功酶． 蓝藻与细菌同属原核生物，但人们对蓝藻的氨基酸的生物台成及调节方式的了解远不及细菌清楚 蓝 藻的氨基酸调节型突变体首次见于阿格 门氏藻，之后在组囊藻、鱼腥藻、聚胞藻、聚球藻 ，螺旋藻中得到 了多类氨基酸调节型突变体。对芳香氨基酸台成途径及酶学调节方式的分析表 明在蓝藻 中普遍存在酶活性 的负反馈调节，DAHP台成酶受剐构调节的方式在不同蓝藻中差异较大()。证实鱼腥藻也存在受苯丙氨 酸和酪氨酸调节的DAHP台成酶同功酶[)。某些蓝藻调节型突变体之所 以抗结构类似物，分泌过量氨基 酸 ，是因为受调节的酶丢失了末端产物的剐构抑制特性和可能解除了酶台成的阻遏状态，导致进入氯基酸 台成途径的代谢物增多([ ]。 本文报道鱼腥藻1017抗8一氟色氨酸 (8FT)突变体的筛选和特性分析，韭对分泌色氨酸的突变体的 抗性机理作了些探讨 。 材料和方法 1．薰种、皇株及培养 藻种为鱼醒藻 (Anabaeaasphaerica)1o1T(本所第五研究室提供)， ~Wolk和Wojciuch方式()分离无菌藻株 ，富营养细菌培养基上检验 。大肠杆菌色氨 酸 营养 缺 陷 型 (E．colitrp。)(武汉大学生物 系微生物生理实验室提供 )用于蓝藻色氪酸调节型突变体的生物测试 ， 预备实验表明该菌株对色氨酸营养的铸要是绝对 的． 鱼腥藻 1017在32C、60uEM。IsecI1条件下分另U用HB¨l，AA(。)进行澈体 固体培养。E．coli按 通常微生物培养方法培彝。 2．突变体的诱变和赫选 取指数生长期的藻体，用超声波打断藻丝，离心，用HBItI培养基洗绦 后制成悬浮液，黑暗培养24／ix时。诱变前将悬浮澈置于光下培养 2小时，取 5ml悬浮液 ，加MNNG使最 终浓度为300ppm ，30℃ ，光下30分钟。离心 ，沉淀执涤2次 ，再悬浮 。取0．5mL藻悬浮浪于含BFT (1Oppm)的AA固体平皿上 ，再将45℃，8ml含等浓度BFT的半固体培养基 (1 琼脂 )倒入平皿，蓝 迅速摇句，光照下培养。 3．突变体的定性控潮 (1)E．colitrp。检测突变体分珏色氨酸 。取一环 对 数生 长 期 的 E．colitrp一，用生理盐水制成菌悬液，饥饿4小时后，将0．1ml菌悬液均匀擦布在E．coliMM加O．Gml柠 檬酸，0．5ml柠檬酸铁和 imlA 培养基上 。待培养基牧干水分后，用牙簦分别把鱼腥藻的抗 6FT突变株 一 翟工确 位；中国科学院长沙农业现代化研究所 47 维普资讯 和野生型点在培募基j：，光下培葬3天一 (2)在筛选培养基上用野生委盎 硷蝌突变依分泌物。把无盛 6FT贮液，野生型藻悬液移八HBI1l国体 培养基 中 (50℃ ) ，迅速摇 匀 ， 6FT最终度浓 为10ppm。倒 平皿冷凝 收水后将突变株点左平皿上。野生型，棚色氨酸