鼠源和兔源多克隆抗体的比较试验.pdf

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　　　　２０１７（０２上）：１７５－１７７ 鼠源和兔源多克隆抗体的比较试验 １ １ ２ 黄名英 ，傅安静 ，田　润 （１．成都农业科技职业学院，成都６１１１３０；２．四川贝安迪生物基因工程有限公司， 成都６１００４１） ＋ 中图分类号：Ｓ８５２．４３；Ｑ７８ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００４－７０３４（２０１７）０２－０１７５－０３ 　　抗体是高等动物在特异性免疫应答下，负责对特 １．１　基因与菌株 异性抗原进行识别和清除而产生的一种免疫球蛋白， ｄｙｐＢ基因，由苏州金唯智生物科技有限公司合 它是当今生命科学研究中用于特异性分子识别的专 成；Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９（用于目的基因的克隆）、Ｅ．ｃｏｌｉ 用工具之一。鼠源单克隆抗体技术与兔源多克隆抗 ＢＬ２１（ＤＥ３）（用于目的基因的表达），购自四川贝安 体技术是目前免疫学科学研究与临床诊断运用最广 迪生物基因工程有限公司。 泛、商品化市场最完善的两项技术。而自１９９５年Ｈ． １．２　主要培养基 Ｓｐｉｅｋｅｒ－Ｐｏｌｅｔ等人成功获得兔浆细胞瘤细胞系，得 　　ＬＢ培养基，由１％蛋白胨 、０．５％酵母提取物、 到了稳定的兔－兔杂交瘤之后，兔单克隆抗体技术在 １％ＮａＣｌ组成，ｐＨ值为７．０，用于大肠杆菌培养与 近几年也得到了快速发展［１－３］。 ｄｙｐＢ蛋白重组表达。 　　兔抗体系与鼠抗体系虽同属于啮类哺乳动物抗 １．３　其他试剂 体系，仍有各自的物种特征：兔抗体系可以识别更多 　　限制性核酸内切酶，购自宝生物工程（大连）有 的抗原种类，尤其是可以识别鼠源抗原，这是鼠源抗 限公司；镍亲和纯化预装柱，购自Ｎｏｖａｇｅｎ公司；ＢＣＡ 体不能做到的（识别兔源抗原）；其次，兔源抗体 ＩｇＧ 蛋白定量试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公 重链可变区的氨基酸数目比鼠源抗体少，对应的抗原 司；商用免疫制剂（鼠专用），购自索莱宝生物公司； 表位的空间区域更小，因此能够区分更多的抗原表 其余生化试剂，购自Ｓｉｇｍａ公司。 位，产生更多种类的抗体，这使得兔源抗体具有更强 １．４　试验动物 的亲和力，更高的灵敏度，和对不同抗原更明显的区 　　ＫＭ小鼠、Ｂａｌｂ／ｃ小鼠、Ｃ５７ＢＬ小鼠、ＤＢＡ／２小 分度 ［４－５］。 鼠、ＳＤ大鼠、新西兰大耳白兔，均购自成都达硕实验 　　从免疫印迹原理的角度出发，要得到好的杂交效 动物有限公司。 ［６］ ２　方法 果、高亲和力、高特异性、低背景是着重的要点 。 要达到期待中的完美结果，除在杂交过程中通过调整 ２．１　抗原蛋白的表达及纯化 杂交溶液成分改变杂交严谨度外，更重要的是获得优 　　以来源于红球菌（ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｊｏｓｔｉｉＲＨＡ１）的 质的抗体。在制备抗体的过程中，注重抗原蛋白的纯 ｄｙｐＢ基因重组表达产物为抗原。将 ｄｙｐＢ的酶切位 点Ｎｄｅ 与 Ｈｉｎｄ 构建到 ｐＥＴ２８ａ载体，再导入 度和浓度，控制抗原蛋白降解等，都能显著提升抗体 Ⅰ Ⅲ ＢＬ２１（ＤＥ３）中；在阳性菌落于３７℃培养至 ＯＤ 值 的特异性；另一方面，通过提高免疫对象体质、减少患