鹅细小病毒VP2基因的克隆、序列研究及原核表达.pdfVIP

摘 要 f鹅细小病毒(goose 小蚺瘟或Derzs)’s痫。本病主要侵害出壳后4-20日龄的雏鹅、雏番鸭，发病率和死亡 率可达70％．100％。目前尚无治疗该病的特效药物，主要通过传统疫苗进行预防；该病 的确诊主要依赖病毒的分离鉴定和血清学方法，这些传统方法多费时费力。由于本病传 播快、致死率高，开发研制新型的基因工程疫苗以及建立一种快速、简便、特异的诊断 方法非常必要。 VP2是鹅细小病毒结构蛋白之一，是GPV的重要保护性抗原，在体内诱导的抗体具 有中和作用，与主要结构蛋白VP3存在相同的抗原决定簇成分，是制备基因工程疫苗的 一对引物，采用PCR方法对国内GPV分离株H1株的VP2基因进行扩增，扩增产物与 个氨基酸，与己发表B株的VP2基因相比，核苷酸序列有25个碱基差异，推导氨基酸 基因相比，核苷酸同源率分别为98．6％、96．2％、93．2％、80．3％、80 O％，推导氨基酸序 列同源率分别为98 3％、97．5％、96．1％、88．2％、87．4％。系统进化树分析可知：所有比 与预期暴露于病毒最表面的区域相吻合，可能是宿主免疫筛选导致的变异；GPV．H1株 和MDPV之间还存在另一高变区，位于VP2和VP3起始密码子之f司，这可能与两病毒 有不同宿主域相关。3- IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约72ku的融合蛋白，光密度扫描对表达产物 进行初步定量，表明表达产物约占菌体总蛋白的14％。表达产物经Ni—NTA金属鏊合层 ● 进行反应原性分析，结果表明所得6His-VP2融合蛋白具有较好的反应原性。 峙研究为了解国内外鹅细小病毒核苷酸序列演化上的关系，为开发研制新型分子诊 断试剂和抗鹅细小病毒感染的基因工程疫苗提供了理论依据。心 关键词：鹅细小病号V92基因j克啭原核表达： and of ProkaryoticExpression Analysis Cloning，Sequence ParvorirusVP2Gene Goose ABSTRACT as named causitiveofGoose isalso Goose isthe agent plague，which parvovirus fatal of and It of diseases isone disease Muscovy Derzsy’s highly goslings ducklings． and of4to arethemost tothevirus．The Musco