鱼腥蓝细菌PCC7120中与信号转导相关基因的研究及突变体构建.pdfVIP

鱼腥蓝细菌PCC7120中与信号转导相关基因的研究及突变体构建.pdf

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鱼腥蓝细菌PCC7120中与信号转导相关基因的研究及突变体构建

摘要 本文利用生物信息学手段找出了鱼臊蠛细菌PCC7120基因组中所有的丝氨酸/ 苏甄羧,酪霎c酸激瓣窝磷酸酶蕊阂,对其璧褥帮染琶髂上熬逮簧蓑}翻律了一定懿分 析。并对该细菌中部分与信号转导相关的麟因进行中断,筛选得到突鼗体,并进杼 验诚及初步表型分析。 1.惫攫蓝细蘸PCC7120基溺维中丝氨酸,苏氨酸馐£氦羧激酶窝磷酸辩基因匏套技 分析 结构的不同可划分为五个亚类: STK.I亚类只含有一个催化区域;STK。II亚类的C 壤纯蘧域位于C璇,HSTK-I渡类掰甄鸯蠢憨氨酸,苏氮簸激酶静谨纯嚣域,叉含鸯 PCC6803基 3个,属PPl/2A/2B族的有3个。与单细胞集胞藻蓝细藏Synechocystis 因缀院较,只有ll令基霞可以程该基因缓巾我弱裙骰静麓因。经遗传撵捌分析发现, cluster)。 有12个基因在染色体上组成了6对基因簇(gene 2。信号转导相关基因突变体的掏建及表型分辑 本研究全都遁过插入失瀵获得突交傣。首先将PCR扩增片段(~1.5kb)利用Pstl 抗瞧片段,再剥爆趣疽和XhoI位点将已插入抗性基因嬲PCR片段,转入整合载体 pRL271中获得体外基因中断,最后利用三亲本杂交获褥体内突交。本研究共构建了 91个体外基因中断结构,获得23个可能的单交换突变体,53个可熊的双交换突变 钵,对所撂的双交换突变体遴行PCR验谖发现有6个为辩生墼,4个为单交换突变 体,其余43个均为真正盼双交换突变体。将验证的真突变体在缺氮条件下蕊察其辩 产斑异型胞,德仍不能维持厦常生长,遮W能是异型胞的结构被破坏或是异形胞中 的阑氮酶失活。所有这些基因在异形胞的发育过程中起黧要作用。 关键词:鱼疆菔细菌丝氨酸,苏氨酸/酪氨黢激酶欧及磷酸酶突变体表型分析 2 Abstract ThisdissertationsearchedforSer/Thrand kinasesand Tyr phosphatasesgenesb3, in bioinformationtoolsAnabaena the invohredin PCC7120,inactivated genes protein the ofmutants. analyze phosphorylation/dephosphorylation,andphenotypes 1. Searchfor SerfrhrandTyrkinases Wefound52 Ser/Thrand 14 T)rr genesencoding kinases(STPK)andgenesencoding ser/thrand dividedallSTPKsinto5subfamiliesto Tyr phosphateses口P).We according theirownstructure characterizes.STK-I similartothe onlypossessregions typical domainof

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