鹅细小病毒VP1基因的克隆、序列研究及表达载体的构建.pdfVIP

堡主兰垡堡苎 塑 墨 丕!!查些查!!一 摘 要 GPV(G00seParvovirus)依据其形态、生化及培养特性被划归为细小病毒科细小病毒 属成员，71起雏鹅和雏番鸭高度致死性疾病，主要以消化道，尤其是小肠部位的典型病变 为特征。许多国家都爆发过该病，所有分离的GPV抗原性相似．目前主要依据临床症状结 合血清学、病毒学方法诊断该病，这些方法大多费时、费力，容易延误该病的治疗，需建 立～种快速、简便、特异的诊断方法。该病的防制依赖疫苗和抗血清及卵黄抗体的使用。 目前使用的疫苗分为种鹅用和雏鹅用的鹅胚和鸭胚化疫苗，这些疫苗在实际生产中发挥巨 大作用，因其为全毒苗或弱毒苗，存在着潜伏感染，排毒散毒，毒力返祖的缺陷，基因工 程疫苗的研制可解决上述问题。 ／GPV的三种结构蛋白Vial、VP2、VP3位于同一开放阅读框内，共用同一终止密码子， VPl、包含了组成VP2、VP3的所有氨基酸，因其具有这一特殊性，成为本研究的目的基因。 H1株VPl的一 本试验参照Genbank中发表的GPVB株基因序列设计并合成了扩增GPV 对引物，利用PCR技术扩增出长约2．2Kb的目的片段，经酶切鉴定后，将其插入原核表达 I、AhoI多克隆位点间，构建了GPVH1株VPl的原核表达载体 载体pPgoEXHTb的Xba VPl基因由2】99个核苷酸组成，编码732个氨基酸。与B GPI．pPRO。测序结果表明GPV 株、YG株进行了同源性比较，核苷酸同源性分别为98．5％，93．18％：氨基酸同源性分别 为98．09％，95 77％。同时将该目的基因插入到杆状病毒表达系统的供体质粒pFAsrBAcHTb 的XbaI、XhoI多克隆位点间，经酶切、PCR鉴定后，将重组的供体质粒GPl·FAST转 H1株VPI的 化到含有杆状病毒和辅助质粒的DHIOBAc感受态细胞中，获得了表达GPV 重组杆状病毒GPl．BAC。 H1株VPl、VIY2、VP3共同部分的二级结构、抗原性无差别： 进行预测及比较，表明GPV GPV H1株与其他细小病毒VPI HI、B、YG株VPI的二级结构、抗原性存在差别。GPV H1与依赖病毒AAV-2的同源性高于与自主细小病毒的 的氨基酸序列同源性比较证明GPV 同源性。 本试验为进一步研究GPV的分子生物学特性，VPl的理化特性、生物学活性奠定了 基础：为GPV的诊断试剂、基因工程疫苗的研制做了前期工作：同时为GPV的分类地位 及其进化关系提供了佐证。∥ ? 关键词：鹅细小病毒 VPl基因克隆表达载体 兰堕 垫塑!：塑妻!!!至里塑塞堡：查型坌塑墨壅垄塞堡盟塑堡 !!堡兰!旦 of of Vector andConstruction Analysis Expression Cloning，Sequence 1 Parvovirus VPfromGoose Abstraet beenclassifiedits GPV(Goose by