盐生肉质化植物海马齿（Sesuvium portulacastrumL．）中总RNA提取方法的优化.pdfVIP

植物生理学通讯 第44卷 第5期，2008年 l0月 973 盐生肉质化植物海马齿(SesuviumportulacastrumL．)中总RNA提取方法 的优化 杨成龙，段瑞军，郭建春 中国热带农业科学院生物技术研究所，海 口571101 OptimizationM ethodsforExtractingTotalRNA from Salt-livingandSuccu- lentPlantSesuvium portulacastrum L． YANG Cheng—Long，DUAN Rui—Jun，GUO Jian—Chun InstituteofBiotechnologyandBioscience，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences,Haikou571101，China 提要：以海马齿为材料，分别用CTAB法、SDS法、Trizol方法以及改进的CTAB法提取其总RNA，并比较 了各RNA的产 率、纯度和完整性等。结果表明，改进的CTAB法对海马齿总RNA的提取有较好的效果，所得总RNA的28S、18S和5s 条带清晰，A26JA280比值为2．0，A26oA／230比值为2．08，RNA产量可达56 gg· (Fw)。经RT—PcR获得了特异条带，说明利用改 良的CTAB法从海马齿中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强，完全适合于进一步的分子生物学研究。 关键词：海马齿；多糖；多酚；总RNA；改良CTAB 植物中的RNA是分子生物学研究的重要材料， 材料与方法 如：用于Northern杂交分析、RT—PCR、cDNA文 1植物材料 库构建、差示PCR分析及体外转译、基因分离 海马齿(SesuviumportulacastrumL．)采 白海南 和基因转录表达调控等分子研究(李宏和王新力 省海 口市郊区白沙门海滨，用同一株海马齿进行大 1999)。海马齿又名滨水菜，属于番杏科(Aizoaceae) 量扦插，使其成活后，取培养30d后的健康幼苗植 海马齿属(Sesuvium)，生长在海边沙地或盐碱地的多 株作为实验材料。 年生匍匐性肉质草本植物。海马齿的组织中存在 2方法 大量的多糖、多酚和其他次生类代谢物质，这些物 2．1CTAB法 参照曾会才(2003)、方孝东等(1998) 质很容易与RNA共沉淀，干扰RNA的提取和纯化， 的CTAB法进行。 影响RNA 的产量和质量 。因此，要获得完整的、 2．2改良CTAB法 通过综合多种植物RNA提取的 高纯度的RNA是一项较为困难的工作。另外，一 CTAB方法而获得(方孝东等 1998；李宏和王新力 些常用的RNA酶强烈变性剂和较高温度处理都会 1999；Bekesiova等 1999；曾会才2003；史宝胜和卓 使多糖类物质糊化，溶液变得粘稠而不易处理，因 丽环2006；葛晓萍和石琰璨2007)。取3g材料磨 此，去除多糖等物质是分离这类植物组织中RNA的 成粉末，加入到 15mL提取缓冲液[2％CTAB、100 关键。 目前应用较多的有 CTAB法(曾会才 2003)、 mmolL·～Tris—HC1(pH 8．0)、1．4molL·—NaC1、20 SDS法(刘海等2006；杜中军等 2005)、异硫氰酸 mmolL·。EDTA(pH8．O)、2％PVP，用前加入B一巯 胍法(张志刚等2006)、热硼酸盐法(李宏和王新力 基乙醇至终浓度为2％]，用力混匀，于65℃中放置 1999)以及商业试剂盒Trizol等。由于各种不同植 30min，每隔5～10min混匀 1次。然后冷至室温， 物有其各 自的生理结构特点和含有不同的生理代谢