菌种与培养基.PDFVIP

菌種與培養基 ： 本實驗使用兩株Bacillus subtilis （Bs ）菌進行對抗實驗，其一為陽田生技提 供之菌株 （簡稱陽田菌），另一株為實驗室篩出之$10菌；五株植病菌Fusarium oxysporum f. sp. Vasinfectum （BCRC 31611 ）、Rhizoctonia solani （BCRC 31626 ）、 Alternaria solani （BCRC 32123 ）、Phytophthora capsici （BCRC 32226 ）及 Colletotrichum gloeosporioides （BCRC 35073 ）皆購自食工所。 陽田菌及$10菌之平板培養乃使用LA培養基，而液態培養時則使用修飾過之 Difco產孢配方：每公升含有glucose 3 g 、Bacto nutrient broth (Difco) 8 g 、peptone 50 g 、10% (w/v) KCl 10 ml 、1.2% (w/v) MgSO ·7H O 10 ml ，並利用NaOH將pH 4 2 調整為7.6 。使用前每公升培養液再添加下述無菌溶液：1M CaCO 1 ml 、0.01 M 3 MnCl 1 ml及1mM FeSO 1 ml 。五株購自食工所之植病菌，繼代培養乃使用PDA 2 4 培養基 。抗菌操作所使用的平板培養基則使用PDA配方 ，再額外添加5 g/L的 peptone或yeast extract ，並分別簡稱為PDA+P及PDA+Y 。 抗菌操作 ： 先將陽田菌或$10菌繼代至LA plate 中，於37℃培養箱中培養過夜。之後，接 種入裝有200 ml修飾過之Difco產孢配方之500ml凸底搖瓶 ，置入37 ℃震盪培養 箱中 ，以150 rpm震盪培養7天，以確保培養液中有大量的陽田菌或$10菌孢子 。 先將五株植病菌分別接種於兩種平板培養基的正中間 ，置於室溫培養1天。 待植病菌約略長出菌絲 ，再於平板培養基上放置8mm滅菌過之濾片。之後，添加 50 µL的陽田菌或$10菌孢子培養液於濾片上 ，置於室溫培養數日，並觀察其變 化。待菌絲長滿整個plate或菌絲停止拓展 ，便可量測對抗區域的寬度。本實驗控 制組為僅接種植病菌的plate 。 實驗結果 ： 表一 ：陽田菌及$10菌於不同培養基下 ，對於五株植病菌之對抗區域寬度 抗菌區域寬度(mm) 陽田菌 $10 菌 培養基 PDA+P PDA+Y PDA+P PDA+Y Fusarium oxysporum f. sp. Vasinfectum 3.67 2.17 0.00 0.44 （BCRC 31611 ） Rhizoctonia solani 1.67* 1.00* 0.00* 0.00* （BCRC 31626 ） Alternaria solani 4.44 2.60 2.11 0.67 （BCRC 32123 ） Phytophthora capsici 2.22 2.14 2.00 1.56 （BCRC 32226 ） Colletotrichum gloeosporioides 2.89 2.50 1.44 1.44 （BCRC 35073 ） 由表一中數據發現，陽田菌對於這五株植病菌都有抑