高致病性禽流感病毒血凝素蛋白广谱中和表位模拟肽的筛选与 - core.pdf

第 24 卷 　第 6 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol . 24 　 No . 6 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　 2 0 0 8 年 11 月 CH IN ESE J OU RN AL O F V IROL O GY November 2008 高致病性禽流感病毒血凝素蛋白广谱中和表位 模拟肽的筛选与鉴定1 宋慧娟 ,罗文新 ,郑振华 ,陈瑛炜 ,陈毅歆 ,陈自敏 ,张军 ,夏宁邵 (厦门大学 　生命科学学院　国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心 ,福建 　厦门　36 1005) 摘要 : 以 H5N 1 型禽流感病毒 HA 蛋白广谱中和单抗 8 H5 为基础 ,利用噬菌体展示肽库技术及类病毒颗粒融合表 达技术研究 HA 模拟表位 。EL ISA 检测结果显示 :筛选获得模拟 HA 表位的模拟肽 123 ,进行类病毒颗粒融合蛋 白表达后 ,仍具有与 8 H5 单抗特异结合的能力 。免疫荧光检测结果说明 ,类病毒颗粒免疫小鼠后产生了能与 HA 交叉反应的抗体 。禽流感病毒 HA 模拟表位的研究与性质的分析及类病毒颗粒融合蛋白的表达与活性分析 、免疫 原性分析 ,都为研制禽流感通用表位疫苗奠定了基础 。 关键词 : H5N 1 HA 蛋白;噬菌体展示肽库 ;模拟肽 ( ) 中图分类号 :R373 1 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000872 1 2008 060042 106 　　近年来 , H5N 1 型禽流感病毒传播呈增强趋势 , 免疫[ 12 ] ,是当前流感疫苗的主要成分 ,也是寻找中 2005 到 2006 年已迅速蔓延至俄国、欧洲 、非洲及中 和性抗体的关键考虑因素[ 13 ] 。本实验室在禽流感 东地区[ 12 ] 。由于 A IV 抗原变异频繁 ,机体不能有 中和性单克隆抗体研制方面积累了丰富的经验 ,制 效防御病毒的侵袭 ,为疫苗的研究开发提出了严峻 备的 8 H5 单克隆抗体 ,对近年来 34 株 H5N 1 病毒 的考验 。目前虽然已有多种疫苗应用于 A IV 的防 株都有血凝抑制和中和活性 ,具有特异性高 、反应性 治 , 如灭活疫苗 、亚单位疫苗 、重组活载体疫苗 、核 强 、识别谱广的特点[ 14 ] 。该结果提示在 HA 上存在 酸疫苗[3 ] ,但其效率均在 60 %～85 %之间 ,且只针 保守中和表位 ,为通用表位疫苗的研究奠定了良好 对特定类型病毒株 。随着生物化学 、分子免疫学技 基础 。 术及基因工程技术的发展 ,表位疫苗的出现弥补了 本研究采用噬菌体随机肽库技术 ,选用禽流感 传统疫苗的一些不足 ,尤其在诱导细胞免疫方面 ,减 广谱中和抗体 8 H5 对随机十二肽库进行筛选 ;又将 少了疫苗毒副作用 ,提高了安全性 ,增强了免疫针对 表位模拟肽展示在类病毒颗粒上 ,对其免疫原性及 性 。天然表位或模拟表位在很多疾病 , 如 H IV 、 免疫反应性进行分析 , 旨在为高致病性 H5N 1 禽流 [48 ] ( ) H