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一种基于hiv11 tat 蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建
南方医科大学学报
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一种基于;YZ$ %8?)? 蛋白质转导结构域细胞内转导系统的成功改建
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郭爱华 刘志锋 孙学刚 李海玉 邓 鹏 姜 勇 南方医科大学病理生理学教研室 广东省功能蛋白质组学重点
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实验室 广东广州
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摘要 目的 探索本室构建的2W? %*9$;D$?)?$PBE= 重组载体表达的融合蛋白在细胞中转导效率低的原因 建立高效的
细胞内转导系统 方法 通过 IKC 方法去除原有载体中的 PBE= 序列$在改建正确的2W? %*9$;D$?)? 重组载体基础上
编码序列 将经酶切 测序鉴定正确的 质粒转化 经 诱
插入 WRPI $ #F,) 2W?%*9$;D$?)?$WRPI ! #$% \]! %UFW M $ YI?R
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鉴定正确 再经蛋白透析 过滤处理 将 融合蛋白加入 细胞中 用荧光显微
导表达 0F0$I)RW ;D$?)?$WRPI WKZ*
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镜观察 结果 重组质粒2W? %*9$;D$?)? 融合表达载体和2W? %*9$;D$?)?$WRPI 重组载体经酶切 F,) 测序鉴定证
融合蛋白并具有较高细胞内转导活性 结论 成功改建
实构建成功 表达纯化出了高纯度
;D$?)?$WRPI
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2W?%*9$;D$?)?$PBE= 重组载体 正确构建2W? %*9$;D$?)?$WRPI 载体 ;D$?)?$WRPI 融合蛋白高效表达 并具有明
确的细胞内转导活性
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