分子生物学实验 - 湖北大学生命科学学院.docVIP

附件3 湖北大学 分子生物学实验 （0704800293） 实验教学大纲 （第2版） 生命科学学院 生物学实验教学中心 2010年7月 前 言 课程名称：分子生物学实验 实验学时：32学时 适用专业：生物科学；生物技术；生物工程 课程性质：专业必修 一、实验课程简介 分子生物学已是生命科学的重要基础学科之一，其基本理论和实验技术已渗透到生物学的各个领域促进了一些新学科、新专业的兴起和发展、、。实验注重系统培养学生分子生物学实验操作能力，坚持基本理论、基本技术方法、基本素质养成的培养学生模式 质粒DNA的提取 验证性 4 必做 实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 验证性 4 必做 实验四 质粒DNA的限制性内切酶酶切 验证性 4 必做 实验五 从凝胶中回收目的DNA片段 验证性 4 必做 实验六 大肠杆菌感受态细胞的制备 验证性 4 必做 实验七 质粒DNA转化大肠杆菌 综合性 4 必做 实验八 PCR扩增DNA片段 设计性 4 必做 合计 32 实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它 实验一 试剂的配制及仪器设备的使用 实验类型：综合性 实验目的： 学习和掌握试剂配制方法 学习和掌握微量移液器、恒温水浴锅、离心机和漩涡混合器等仪器的使用和操作 学习和掌握分子生物学实验注意事项 实验内容： 试剂配制：dH2O、ddH2O等各种级别水的准备；LB培养基、Tris-HCl、EDTA和TAE等缓冲液和NaOH溶液等的配制和灭菌； 学习微量移液器的使用 学习恒温水浴锅的使用 学习小型离心机、冷冻离心机的使用 学习漩涡混合器的使用 复习分析天平和高压灭菌锅的使用方法 实验要求： 仪器和试剂准备：微量移液、离心机、恒温、，KAc 、NaOH和HAc等。 实验要求： 主要器材试剂微量移液、离心机氨苄青霉素溶液Ⅰ 50mM Glucose，5mM Tris·HCl(pH8.0)，10mM EDTA(pH8.0)溶液Ⅱ 0.4mM NaOH，2%SDS，使用前等体积混合溶液Ⅲ5M KAc(60mL)，HAc(11.5mL)，H2O (28.5mL)TE Buffer 实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 实验类型：验证性 实验目的： 学习和掌握电泳仪和紫外发光装置的使用方法 学习和掌握琼脂糖凝胶的制备和检测DNA的原理和方法 实验内容： 配制一定浓度的琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶染色紫外（360nm或254nm）下观察电泳凝胶（DNA存在处显示出荧光条带）。 主要器材试剂微量移液、紫外TAE缓冲液（H8.5）40mM Tris, 2mM Na2EDTA·2H2O ,1.42mL醋酸 实验四 质粒DNA的限制性内切酶酶切 实验类型：验证性 实验目的： 掌握限制性内切酶酶切DNA的原理 学习和掌握制性内切酶单酶切和双酶切DNA的方法 实验内容： 选用合适的限制性内切酶、在合适的反应体系中酶切质粒水浴锅放入水浴锅保温1小时取出酶切产物，电泳检测酶切。 主要器材试剂：水浴锅 实验五 从凝胶中回收目的DNA片段 实验类型：验证性 实验目的： 掌握从琼脂糖凝胶中回收目的DNA的原理 学习和掌握从琼脂糖凝胶中回收目的DNA的方法 实验内容： 琼脂糖凝胶电泳分离DNA样品 将凝胶染色，切割含有目的DNA的琼脂糖凝胶凝胶电泳检测回收主要器材：微量移液、紫外水浴锅TAE缓冲液 实验六 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验类型：验证性 实验目的： 掌握制备大肠杆菌感受态细胞的原理 学习和掌握制备大肠杆菌感受态细胞方法 实验内容： 大肠杆菌菌种的活化 配制制备感受态细胞的试剂和培养基 将活化的菌种接种培养 制备感受态细胞 学习和掌握无菌操作 实验要求： 主要器材：微量移液LB培养基（1% Tryptone，0.5% Yeast extract，1% NaCl1.5%Agar）、CaCl2 实验七 质粒DNA转化大肠杆菌 实验类型：综合性 实验目的： 掌握DNA转化大肠杆菌感受态细胞的原理 学习和掌握DNA的化学法转化大肠杆菌感受态细胞方法并分析转化效率 实验内容： 学习质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞 学习分析转化效率 实验要求： 主要器材：微量移液LB培养基、合适的抗生素 实验八 PCR扩增DNA片段 实验类型：设计性 实验目的： 掌握PCR扩增DNA的原理 学习和掌握设计PCR引物和PCR扩增DNA的方法 实验内容： 根据DNA序列设计PCR引物 合成PCR引物 根据引物的特征，设定合适的PCR条件，扩增DNA片段 琼脂糖凝胶电泳检测扩增的DNA片段 实验要求： 主要器材：：微量移液