药学分子生物学（吕昌莲）第4章 蛋白质合成.docVIP

第四章 翻译及其调控 第 一 节 蛋白质的生物合成Protein Biosynthesis 蛋白质生物合成体系 基本原料：20种编码氨基酸 模板：mRNA 运载体：tRNA 场所：核蛋白体 主要酶和蛋白质因子：氨基酰-tRNA合成酶、转肽酶、起始因子、延长因子、释放因子等 能源物质：ATP、GTP 无机离子：Mg2+、 K+ 一、蛋白质合成的模板-mRNA 1.原核生物mRNA的特点 （1）半衰期较短 （2）SD序列 （3）多顺反子 S-D序列 在各种mRNA起始AUG上游约8～13核苷酸部位，存在一段由4～9个核苷酸组成的一致序列，富含嘌呤碱基，如-AGGAGG-，称为Shine-Dalgarno序列(S-D序列)，又称核蛋白体结合位点(ribosomal binding site, RBS)。 小亚基中的16S-rRNA 3ˊ-端有一富含嘧啶碱基的短序列，如-UCCUCC-，通过与S-D序列碱基互补而使mRNA与小亚基结合。 mRNA序列上紧接S-D序列后的核苷酸序列，可被核蛋白体小亚基蛋白rpS-1识别并结合。 多顺反子mRNA(polycistron mRNA) ： 原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录单位，转录生成的mRNA可编码几种功能相关的蛋白质，称为多顺反子mRNA。 2. 真核生物mRNA的特点 （1）转录和翻译分别在细胞核和细胞浆中完成。 （2）半衰期相对较长（几小时甚至几天） （3）Kozak 序列：mRNA起始密码子处的一段保守序列-CCACCAUGG-，能增加翻译起始的效率。 （4）单顺反子 3.mRNA遗传密码(Genetic Code) mRNA功能：蛋白质生物合成的直接模板 遗传密码 密码子（codon） 在mRNA的开放阅读框架区，以每3个相邻的核苷酸为一组，代表一种氨基酸，这种三联体形式的核苷酸序列称为密码子。 终止密码子 (termination codon/stop codon): UAA，UAG，UGA 又称为无意义密码子 起始密码子 (initiation codon/start codon) : AUG 编码甲硫氨酸、N-甲酰甲硫氨酸 遗传密码的特点 （1）方向性 翻译时遗传密码的阅读方向是5’→3’，即读码从mRNA的起始密码子AUG开始，按5’→3’的方向逐一阅读，直至终止密码子。 （2）连续性 编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码子及密码子的各碱基之间既无间隔也无交叉。 基因损伤引起mRNA阅读框架内的碱基发生插入或缺失，可能导致框移突变(frameshift mutation)。 （3） 兼并性 一种氨基酸可具有2个或2个以上的密码子为其编码。 除色氨酸和甲硫氨酸仅有1个密码子外，其余氨基酸有2、3、4个或多至6个三联体为其编码。为同一种氨基酸编码的各密码子称为兼并性密码子，也称同义密码子 。 各种氨基酸的密码子数目 （4）摆动性(wobble) 反密码子与密码子之间的配对有时并不严格遵守常见的碱基配对规律，这种现象称为摆动配对(wobble base pairing)。 tRNA反密码子 第1位碱基 I U G A C mRNA密码子 第3位碱基 U, C, A A, G U, C U G （5）通用性 从简单的病毒到高等的人类，几乎使用同一套遗传密码。 发现少数例外，如动物细胞的线粒体、植物细胞的叶绿体。 （6） 偏爱性 (biar/preference ) 同义密码子使用频率不同.原因：tRNA含量不同.利用：选用偏爱密码子，提高基因表达效率。 （二）蛋白质生物合成的场所——核糖体 （Ribosome) 核糖体又称核蛋白体，是由rRNA和多种蛋白质结合而成的一种大的核糖核蛋白颗粒，是蛋白质生物合成的场所。 不同细胞核蛋白体的组成 原核生物 真核生物 核蛋白体 小亚基 大亚基 核蛋白体 小亚基 大亚基 S值 70S 30S 50S 80S 40S 60S rRNA 16S-rRNA 23S-rRNA 5S-rRNA 18S-rRNA 28S-rRNA 5.8S-rRNA 5S-rRNA 蛋白质 rpS 21种 rpL 36种 rpS 33种 rpL 49种 原核生物核蛋白体结构模式 P位：肽酰位(peptidyl site)A位：氨基酰位(aminoacyl site)E位：排出位(exit site) （三）运载工具——tRNA 氨基酸臂 反密码环 tRNA的作用 运载氨基酸：氨基酸各由其特异的tRNA携带，一种氨基酸可有几种对应的tRNA，氨基酸结 合在tRNA 3ˊ-CCA的位置，结合需要ATP供能； 充当“适配器”：每种tRNA的反密码子决定了所携带的氨基酸能准确地在mRNA上对号入