利用重组大肠杆菌生产2,3--二磷酸甘油酸的研究.pdfVIP

利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究 中文摘要 mutase， 925年被发现的 113称DPGM，diphosphoglyceratemutase)催化1，3．BPG生成。最早于1 的别构调节物，与血红蛋白等摩尔结合，因此是调节02和血红蛋白亲和力的重要因素。 当血液流经组织时，高含量的2，3．BPG的存在能显著增加02的释放并供组织需要。 因此，2，3．BPG在预防和治疗高原反应，提高运动员身体机能等方面有着极大的应用 价值。鉴于目前尚无人工合成2，3．BPG的报道，也无合适方法从血液中富集回收，我 们考虑运用基因工程的方法来进行2，3．BPG的生产。因为大肠杆菌中不存在BPGM， IPTG进行诱导，通过向培养基中加入葡萄糖，利用大肠杆菌的糖酵解途径来生产 2，3．BPG。资料显示BPGM在Cl。的存在下主要发挥磷酸酶活性将2，3．BPG分解为 3-PGA和无机磷，通过孔雀石绿法定磷法检测无机磷在630nm的吸光度，根据无机磷 标准曲线得到发酵产品中2，3．BPG的含量。 h，并发 在培养条件上，我们摸索到合适的葡萄糖浓度为109／L，合适的诱导时间为4 现在诱导时加入终浓度0．5％的Tween80可以促进2，3．BPG穿过大肠杆菌细胞壁分泌 入培养基。为接下来的回收纯化工作打下了良好的基础。 关键词：2,3．二磷酸甘油酸；二磷酸甘油酸变位酶；葡萄糖： 利用重组大肠杆菌生产2，3-二磷酸甘油酸的研究 Abstract anisomerofthe 2,3-BPG(2，3一Bisphosphoglycerate)is whichactsasanintermediateinthe Callbe theexclusive glycolysispathway．Itcatalyzeby name enzyme—BPGM(BisphosphoglycerateMutase，oldDiphosphoglycerate firstfound existsin and was Mutase．DPGM)thatmerely erythrocyteplacenta．2,3一BPG actsas in1 notuntil1965haditsfunctiontobeclearedBenesch．Cause 925，but by 2,3一BPG allallostericmodelandcombineswiththe inamount．Thusit a hemoglobinequally plays flows criticalrolein the betweenand blood 02 pass adjustin